免疫佐剂是一种非特异性免疫增强剂，其种类繁多，如卡介苗、脂多糖、氢氧化铝、明矾、矿物油，以及近年来开始应用的脂质体和CpG寡核苷酸等。其作用机制主要有三种：一是通过改变抗原的物理性状，增加抗原在体内的潴留时间；二是通过刺激单核—巨噬细胞，增加对抗原的处理和呈递能力；三是通过刺激淋巴细胞的增殖分化，从而增强和扩大免疫应答的能力。 处于特定碱基背景中的非甲基化的CpG二核苷酸(CpG基序)在细菌及病毒的DNA中普遍存在，而在哺乳动物中则被强烈抑制和甲基化。含CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)可通过其受体TLR-9诱导MAPK和NF-κB的活化而直接活化表达TLR-9的浆细胞样前DC细胞(pDC)和B细胞，间接活化单核、巨噬细胞、NK细胞和T细胞，提高中性粒细胞的防御反应能力，并诱导Th1样致炎细胞因子、干扰素和趋化性细胞因子的分泌，从而激活天然免疫应答和诱导适应性免疫应答。含不同骨架的寡核苷酸有不同的免疫活化效应，CpG-A ODN可有效地活化NK细胞，诱导浆细胞样树突状细胞前体产生IFN-α；而CpG-B ODN有很强的活化B细胞的能力，而其活化NK细胞的能力较低。CpG ODN在对肿瘤、过第四军医大学硕士学位论文 中文摘要敏性疾病及感染性疾病的预防和治疗疫苗中有广阔的应用前景。 本文中，我们首先对新型免疫佐剂（CpG ODN）的免疫调节作用进行了初步研究，并与弗氏佐剂进行了对比。依照重复、对照、随机的统计学原则，分别用新型佐剂和弗氏佐剂混合原核表达的诱导增殖的配体 （APRIL）免疫原，以常规方案免疫，检测了不同时间点（第一次免疫后SW和SW）各组小鼠免疫血清抗APRIL抗体的总效价及各种Ig类和亚类效价，结果表明，新型免疫佐剂（CpG ODN）能够诱导比弗氏完全佐剂更为强烈的Thl型免疫应答，并能促进IgGZa、IgM及IgA的优势分泌。此外，本实验还建立了一种能在单个细胞水平反映小鼠B细胞分泌特异性抗体类和亚类的改良ELISPOT方法。 生命科学的发展极大地依赖于实验技术的进步，单克隆抗体制备技术也己成为生物工程的核心技术之一。蛋白组学研究是继基因组学研究后的生命科学发展的重要方向之一。抗体芯片技术为蛋白组学研究提供了新的手段。显然，单克隆抗体制备技术己成为蛋白质组学研究的重要技术之一。本实验又对新型免疫佐剂在淋巴细胞杂交瘤技术中的应用进行了研究，并分别在免疫原用量、免疫周期、InAb的类和亚类三个方面与传统的弗氏佐剂进行了比较。结果表明，新型免疫佐剂能够显著地减少＂LAb制备所需的兔疫原用量，缩短免疫周期，并可优先获得IgGZa和IgM的InAb。 本实验所用免疫原APRIL是新发现的T’NFSF的成员，也是第八届人类白细胞分化抗原国际协作组会议（HLDAS）的 198个侯选CD分子之一，在调节T细胞的存活及活性、B细胞活性及许多重要的生理和病理过程中可能有重要的作用。本实验建立了10株能够稳定分泌可识别天然和变性APRIL的InAb的杂交瘤细胞株，并对ITUlb进行了初步鉴定。这为在HLDAS中申报新的CD编号提供了有利条件，并为进一步研究APRIL及其亚家族的功能研究提供了重要手段。此外，利用ITUlb对APRIL的表达分布作了初步的研究，发现APML除可表达于人外周血单个核细胞 0BMC）、扁桃体细胞、脐带血B细胞等天然细胞外，还可表达在Ran细胞系和骨髓瘤细胞系等肿瘤细胞系，提示APRIL可能参与淋巴细胞的硕士研究生：许晓光 导师：金伯泉、朱勇4第四军医大学硕士学住论文 中文摘要分化与发育过程及肿瘤的发生。