黄瓜枯萎病病原拮抗菌的筛选鉴定及其生防效果研究

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设施蔬菜栽培过程中,伴随连作年限的增加,土壤中有害真菌的种类和数量增加,有益细菌的种类和数量减少,微生物区系平衡遭到破坏,土传病害加重。黄瓜是设施栽培的主要蔬菜作物,对连作反应敏感。枯萎病是黄瓜生产中的主要土传病害,连作条件下为害严重,甚至导致绝产。本论文立足我国北方地区日光温室生产实际,从连作黄瓜根际土壤中分离筛选对枯萎病病原菌有效的拮抗菌株,进行分类鉴定,并进一步研究其对黄瓜(品种“新泰密刺”)枯萎病的生防效果和植株生长代谢的影响,探讨适宜的发酵条件,以期为通过生物学途径改良设施连作土壤和控制蔬菜土传病害提供依据。主要结果如下:1.从日光温室连作黄瓜根际土壤中分离到大量菌株通过平板对峙法测定,筛选出对枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum )有稳定拮抗作用的菌株10株,其中细菌2株,分别命名为DS-1、Q-2,放线菌8株,分别命名为SZ-1、SZ-67、SG-126、SG-127、SG-147、SG-363、SG-494、ZL-1,这些拮抗菌株在PDA平板上对枯萎病病原菌的抑菌率达到30.5%~45.5%。2.黄瓜种子发芽和苗期病害防治试验结果表明,除放线菌株SZ-67抑制种子发芽以及SG-494对幼根生长有抑制作用外,其余菌株对黄瓜种子萌发均无不良影响,其中DS-1、Q-2、SG-147、ZL-1、SG-127和SG-126对种子萌发均有不同程度的促生作用;10株拮抗菌株防治黄瓜苗期枯萎病的效果显著,防效达到55.56%~88.89%,以SG-126的防治效果最佳。3.根据形态学观察、生理生化测定和16Sr DNA序列的同源性分析,拮抗菌株DS-1、Q-2分别为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)和抗生素溶杆菌(Lysobacter antibioticus),基因库中两菌株的登陆号分别为EF108303和EF108304。4.摇瓶发酵试验结果表明,DS-1发酵的优化条件为温度28℃、pH7.0、供氧充足;Q-2发酵的优化条件为温度28℃、pH8.0、供氧充足。两者生长曲线基本符合细菌的典型生长特性。5.利用拮抗菌株DS-1、SG-126和Q-2接种日光温室连作黄瓜土壤,研究对枯萎病防效、植株生长和代谢的影响,结果表明:3株拮抗菌株均可提高黄瓜对枯萎病的抵抗能力,减少发病率,DS-1、SG-126和Q-2防治黄瓜枯萎病的效果分别达到51.43%、42.86%和22.86%;其中,DS-1和SG-126显著促进了黄瓜的生长发育,Q-2效果较差;接种拮抗菌不同程度地提高了黄瓜叶片中的保护酶(SOD、CAT、PPO和PAL)活性和叶绿素含量,降低了电解质渗漏率。
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