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本文首次在国内对鸡堆型艾美耳球虫建立了针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株并对其进行了初步鉴定。 首先制备鸡堆型艾美耳球虫子孢子可溶性抗原，卵囊雏鸡体内复壮、收获卵囊、体外孢子化、纯化孢子化卵囊、机械破碎卵囊壁、脱孢子囊、子孢子过DEAE-52纤维素柱纯化以及子孢子的超声裂解，最终离心的上清即为子孢子可溶性抗原，经紫外法和Bradford法测得三个抗原样品的浓度分别为818.4μg/ml、440μg/ml和706μg/ml，并对纯化卵囊、孢子囊、子孢子进行照相；用于孢子可溶性抗原与弗氏完全佐剂乳化，以腹腔途径对BALB/c小鼠进行基础免疫，然后，与等量弗氏不完全佐剂乳化进行追加免疫，再隔两周，然后用PBS与抗原混合进行第三次免疫，再于融合前3天，经尾静脉及腹腔加强免疫一次，每次免疫剂量均为100μg/只，结果证明四次免疫的血清中抗体的OD值达到1.0以上；经饲养细胞、SP2/O骨髓瘤细胞的培养以及SP2/O骨髓瘤细胞和免疫脾细胞融合后杂交瘤细胞的培养试验，可以知道培养液的营养条件对细胞生长起到关键作用，同时也可以知道SP2/O骨髓瘤细胞的形态、BALB/c小鼠的免疫状况、PEG、培养液的酸碱度对细胞融合率的高低至关重要，本试验中在288孔中，融合孔为238孔，融合率为82.6％；通过常规间接ELISA方法对抗原包被浓度，血清稀释倍数，二抗稀释倍数条件进行摸索，确定出最佳反应条件为：抗原包被浓度5μg/ml，血清稀释倍数为1，000倍，二抗稀释倍数为2，000倍，一抗、二抗的最佳孵育温度为37℃，时间为1h，在融合细胞阳性筛选及抗体效价测定过程中，反应条件稳定；阳性细胞株的筛选克隆及扩大培养，通过间接ELISA方法对融合孔进行检测，最终建立了2株分泌抗体较强的细胞株5G7和5B4，并进行克隆化及扩大培养；将培养的阳性细胞经离心(1，000rpm，10min)，弃上清，加入适量冻存液制成细胞悬液分装于冻存管中，封口，记录细胞名称及日期，于4℃(15min)，-20℃(2h)，-80℃(过夜)，最后转入液氮中长期保存，3天后从液氮罐中取出一只，快速解冻、离心、培养，细胞生长良好，证明此冻存方法是可行的；抗体的大量制备及腹水的纯化，将培养好的细胞经注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水，腹水经正辛酸-硫酸铵二步法纯化，SDS-PAGE结果表明此方法对5G7细胞株纯化效果较好；腹水效价测定，用间接ELISA方法对两株细胞的腹水效价进行测定，结果为5G7细胞株的腹水效价为：1：262，144；5B4细胞株的腹水效价为：1：131，072：对杂交瘤细胞进行染色体分析，两亲本细胞分别是小鼠骨髓瘤细胞SP2/O和BALB/c小鼠脾细胞，BALB/c小鼠脾细胞的染色体数目为40个，SP2/O为62～68个，两株细胞染色体数目分别为100.67+4.92和98.43+2.98，结果表明：两株单克隆抗体细胞株的染色体数目均接近两亲本的染色体数目之和；经捕捉ELISA方法鉴定两株单克隆抗体细胞株的亚类均为IgG1；经免疫组织化学和免疫荧光检测试验，从照片的结果表明所建立的单克隆抗体细胞株所分泌的特异性抗体是针对子孢子的。