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研究背景:新生儿缺氧缺血性脑病(HIBD)指在围产期发生的新生儿缺氧和窒息,是临床的高危常见病,并发症和后遗症较多,临床治疗手段如亚低温、高压氧等方法的疗效和预后并不十分显著,且易引起组织损伤、感染等不良后果。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是人体内可提取的天然糖蛋白分子,可由单核巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞和间皮细胞等多种组织产生,能促进中性粒细胞增殖、分化和成熟,此外还能促进细胞迁移、抑制炎症、减少细胞凋亡等多种功效。本研究探讨G-CSF能否抑制HIBD新生大鼠海马区的小胶质细胞炎症反应并发挥远期的功能保护作用,以期为临床药物治疗提供参考依据。目的:为了研究粒细胞集落刺激因子对缺氧缺血新生大鼠的海马小胶质细胞的抗炎保护作用和对海马学习记忆功能的神经保护作用。方法:本实验分为2个部分,第一部分将90只7日龄的新生SD大鼠随机分为假手术组(SHAM组)、损伤组(HIBD组)、给药组(G-CSF组),每组30只,分5个时间点测量指标,即损伤后3天(D3)、损伤后5天(D5)、损伤后7天(D7)、损伤后14天(D14)、损伤后21天(D21),每组每个时间点随机分6只乳鼠。HIBD组和G-CSF组均结扎右侧颈总动脉并进行缺氧处理,SHAM组仅暴露术口不结扎动脉、不缺氧,G-CSF组在造模后1小时、1天、2天均腹腔注射60 μ g/kg粒细胞集落刺激因子,HIBD组和SHAM组均注射等量生理盐水作为对照,在造模后D3、D5、D7、D14、D21分别行心脏灌注固定,取脑标本测定D3、D5、D7时间段的脑组织中小胶质细胞和炎症因子共定位表达量,以及5个不同时间段组间促炎因子和抗炎因子的表达水平变化。第二部分随机将30只7日龄SD大鼠分为SHAM组、HIBD组、G-CSF组,每组10只,造模及给药方法同第一部分,2月龄时进行水迷宫行为学测试。结果:第一部分实验结果发现,缺氧缺血损伤后3天小胶质细胞数显著升高,到7天、14天时数量渐少;损伤后Iba-1/TNF-α和Iba-1/TGF-β的共定位表达细胞数均升高,相比于HIBD组,G-CSF组Iba-1/TGF-β的共表达量更多、Iba-1/TNF-α的共表达高峰延迟;TNF-α的荧光阳性样本量在损伤后3天达高峰,之后逐渐下降并趋平稳,G-CSF作用下TNF-α水平在D3显著低于损伤组;TGF-β的荧光样本量在损伤后3天、5天均较高,且G-CSF能升高并延长TGF-β的表达量和高峰时间。第二部分结果表明,随训练天数增加,大鼠找到平台用时越来越短,训练第4天HIBD组的花费时间显著多于SHAM组,G-CSF组定位平台的耗时短于HIBD组但无统计学差异;空间探索实验中HIBD组在目标象限停留时间和穿越平台次数均明显少于SHAM组,G-CSF组的停留时间和穿越次数虽多于HIBD组但差异不显著。结论:G-CSF能促进缺氧缺血损伤后海马齿状回的小胶质细胞活化和表达,具有显著的抗炎保护作用,改善海马的远期学习记忆等功能。