研究背景肝病是一种存在于全世界范围内常见且危害性极大的疾病,临床研究表明,一系列肝病包括肝硬化和肝癌等的发生与肝炎密切相关。因此,对肝炎的治疗在预防肝病恶化中显得尤为重要。越来越多的证据表明,肝炎的发病机制与机体介导的免疫调节密不可分。Toll样受体作为连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁,在肝脏炎症产生过程中,其家族成员TLR2被证明发挥着关键作用。TLR2与其内源性配体结合后通过激活下游NF-κB和MAPK信号通路导致促炎细胞因子释放,如TNF-α,IL-6,IL-1β等,并进行系统的炎症反应。因此,抑制TLR2可能成为治疗肝炎及其相关性疾病的重要靶标。然而,在近年来已发现某些TLR2抑制剂中,由于大多数只有一般的TLR2抑制活性或化学结构稳定性差等因素,它们的后续研究受到限制。研究目的本课题以天然产物异甘草素为先导化合物,合成一系列的异甘草素衍生物,旨在寻找具有高活性且低毒性的TLR2小分子抑制剂并评估其抗急性肝炎作用。研究内容（1）化合物的合成:以异甘草素为先导化合物共合成40个衍生物。合成优化思路如下,探索母核结构中各个苯环部分的不同取代基对活性和毒性的影响,如改变其亲水性,电子效应和空间位阻等。另外,还聚焦母核结构的中间链状部分,通过形成五元或六元含氮杂环得到具有全新结构异甘草素衍生物。（2）体外活性研究:采用原代小鼠腹腔巨噬细胞,通过考察化合物抑制Pam3CSK4激活的NO信号,测试其生物活性,随后通过MTT法进行化合物细胞毒性检测。此外,在腹腔巨噬细胞中,通过流式细胞仪检测特异性生物标记CD86和CD11b的表达情况分析M1表型巨噬细胞的极化情况进而判断化合物减轻炎症的效应机制。同时利用Raw264.7、BMDC和PBMC等不同细胞系考察通路相关的Pam3CSK4介导的炎性因子抑制情况,并应用Western Blot检测TLR2蛋白的表达含量。（3）体内药效评价:静脉注射伴刀豆球蛋白A建立急性肝炎小鼠模型,通过对照分析小鼠体内血清丙氨酸转氨酶表达水平,巨噬细胞极化情况以及肝脏组织切片以评估抗炎活性最优化合物的抗急性肝炎作用。研究结论我们通过结构改造、优化及生物活性分析发现了结构最优化合物5n（SMU-B14）。研究表明SMU-B14在小鼠腹腔巨噬细胞中可抑制由Pam3CSK4激活TLR2通路产生的一氧化氮（NO）信号,除此之外,在Raw264.7和人外周血单核细胞系（PBMC）中对Pam3CSK4诱导的炎症因子TNF-α也有强的抑制作用。值得一提的是,与异甘草素相比SMU-B14具有较好TLR2抑制活性同时具有更低的细胞毒性。另一方面,在蛋白水平上也观察到SMU-B14对TLR2蛋白的表达呈剂量依赖抑制效果。在小鼠腹腔巨噬细胞中,结构优选化合物SMU-B14在10μM时显着降低CD86和CD11b的表达,表明M1表型巨噬细胞的极化受到阻碍,炎症反应得到抑制。体内实验表明,SMU-B14能降低血清中丙氨酸转氨酶的表达水平,减少中性粒细胞的积累以及抑制巨噬细胞向M1表型的极化,最终减轻急性肝炎诱导的肝损伤。