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丙氨酸脱氢酶（Alanine dehydrogenase, ALD）是一种以NAD+为辅酶的氨基酸脱氢酶,它可以通过氧化脱氨基反应使丙氨酸生成丙酮酸和氨,这个过程是可逆的。丙氨酸脱氢酶在糖代谢和氨基酸代谢中发挥着重要作用,它的催化产物丙酮酸被广泛地应用于农业、工业和医药等领域。本实验以假坚强芽孢杆菌Bacillus pseudofirmus来源的Ald基因为研究对象,将其插入到原核表达载体pET-22b（+）上。构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,用IPTG对目的蛋白ALD （NCBI参考序列：WP012959278.1）进行诱导表达。经大量表达后,利用镍离子亲和层析对ALD蛋白进行初步纯化,并通过离子交换层析和凝胶过滤层析对ALD蛋白进行进一步纯化,最终获得了高纯度的ALD蛋白,可用于蛋白结晶。利用气相扩散法筛选ALD蛋白结晶条件,并对结晶过程中的pH、沉淀剂种类和浓度、结晶温度、蛋白浓度等条件进行优化。最终确定蛋白最佳的结晶条件如下：结晶温度为16℃；结晶方式为悬滴法；池液条件为4%（v/v） Tacsimate pH 5.0,8% （w/v） PEG3350;添加剂为9mmol/L 的L-proline;蛋白结晶浓度为10 mg/mL。对得到的ALD蛋白晶体进行X射线衍射,通过对衍射数据的收集和处理,最终获得蛋白晶体的分辨率为2.87A。经初步分析,得知该蛋白晶体所属的空间群为P212121,晶胞参数为a=97.40 A,6=156.73 A, c=169.10A, α=90°, β=90°, γ=90°。同样利用气相扩散法对丙氨酸脱氢酶（ALD）的二元复合物和三元复合物的结晶条件进行了筛选及优化,晶体经X射线衍射后,衍射分辨率较低,需要进行进一步的优化。对丙氨酸脱氢酶的突变体蛋白ALD R15A进行了表达和纯化,并得到了突变体蛋白的晶体,晶体优化实验正在进行中,以期望得到较好的衍射数据。本实验获得了ALD蛋白晶体的结晶条件,并分析得到了蛋白晶体衍射的相关数据,为其空间解结构的解析提供了理论依据,并为进一步研究其作用机制及生物学功能奠定了基础。