论文部分内容阅读
研究背景据2012年美国癌症统计报告显示美国女性肿瘤新发病例790740,其中乳腺癌居女性发病率第一位,占新发肿瘤的29%；死亡病例275370,乳腺癌占14%,是女性肿瘤患者死亡的第二大原因。据流行病学研究全国32个肿瘤登记点2003-2007年资料分析报告显示我国城市地区女性乳腺癌的合计发病率为49.17/10万,在城市女性癌症新发病例构成中排列第1位,占全部癌症新发病例的19.62%。农村地区女性乳腺癌的合计发病率为16.16/10万,在农村女性癌症新发病例构成中排列第5位,占全部癌症新发病例的8.42%。近年来,尽管手术、药物等治疗方式有了巨大的发展,但是在初步诊断和切除原发肿瘤数十年后25%-50%的患者最终发展为致死性的转移,乳腺癌发生转移仍然限制病人生存和有效治疗。转移是恶性肿瘤最显著的生物学特征,是临床上大多数肿瘤患者治疗失败和致死的主要原因。乳腺癌转移是多步骤、多因素参与的极其复杂的过程,受到肿瘤本身和宿主环境等因素的影响。近年来随着对恶性肿瘤发生发展机制研究的不断深入,人们越来越认识到乳腺癌发生发展过程中炎性微环境发挥主要的作用,有关炎症与肿瘤转移之间的关系成为人们研究的热点之一。本研究通过建立炎症实验动物模型及其基础上建立乳腺癌肺转移模型,旨在探讨炎症在乳腺癌肺转移过程中的作用及可能的机制。研究方法将BALB/c雌性小鼠随机分为5组：PBS组、LPS组、LT组、PT组、Cele组,每组10只。每组给予不同的处理：①PBS组：给予腹腔注射PBS溶液；②LPS组：给予腹腔注射LPS溶液；③PT组：给予PBS溶液+尾静脉注射4T1细胞；④LT组：给予LPS溶液+尾静脉注射4T1细胞；⑤Cele组：给予LPS溶液+尾静脉注射4T1细胞105+塞来昔布(celecoxib)。PBS. PT组2组小鼠,腹腔内注射PBS0.1ml (5mg/Kg),连续3天；LPS、LT及Cele组3组小鼠,腹腔内注射浓度为LPS0. lml (5mg/Kg),连续注射3天。实验第4天各组小鼠分别给予不同处理,采用眼球取血法处死PBS组、LPS组小鼠,收集血浆,采用酶联免疫法测定血浆VEGF、MCSF、IL-6、TNF-α的水平,收集肺组织,观察肺组织病理学表现,采用免疫荧光CD31染色比较两组小鼠肺组织血管的变化。PT组、LT组及Cele组：实验第5天,分别经尾静脉注射乳腺癌4T1细胞0.1ml,细胞浓度为1×106/ml,其中PT组、LT组小鼠自由进食,Cele组小鼠给予塞来昔布0.5mg/Kg/d灌胃。2周后处死全部小鼠,观察肺组织病理学表现,肉眼观察及HE染色比较两组小鼠出现肺转移的数量。实验数据结果以均数±标准差(x±s)来表示,采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析,两样本比较采用t检验,肺转移率比较用卡方检验。研究结果1.血浆中细胞因子表达水平的改变PBS组、LPS组小鼠血浆中VEGF的含量分别为28.6±3.2ng/ml、139.1±5.7ng/ml;PBS组、LPS组小鼠血浆中的MCSF含量分别为5.7±1.5ng/ml、18.6±2.3ng/ml；PBS组、LPS组小鼠血浆中IL-6的含量分别为12.2±1.4ng/ml、15.6±2.5ng/ml；PBS组、LPS组小鼠血浆中TNF-α的含量分别为4.5±1.8ng/ml、50.9±4.6ng/ml。2.脂多糖诱导肺组织炎性细胞浸润LPS组小鼠肺组织肉眼观察：肺叶水肿、充血,呈暗红色；HE染色镜下：肺泡壁连续性中断,壁内毛细血管扩张充血,肺泡腔内可见大量红细胞、炎症细胞,气道粘膜见有大量炎性细胞浸润。PBS组小鼠肉眼观察：肺脏大小正常,呈粉红色；HE染色镜下：肺脏结构致密,肺泡壁连续规整,肺泡内无组织液。3.脂多糖促进肺血管增生紊乱LPS组CD31抗体标记的红色血管密度明显增大,血管扭曲明显。呈现原始、扩张的窦状隙结构,血管丛表现为紊乱无序、扭曲、内部相互交通。4.肺部炎症对乳腺癌肺转移的影响肺组织肉眼观察：LT组70%(7/10)小鼠肺表面可见1个或多个肿瘤结节,PT组(1/10)小鼠肺表面见肿瘤结节,两组比较P=0.02,差异有统计学意义；镜下：LT组,部分肺泡壁结构破坏,结构不连续,局部有纤维组织增生,肺泡壁增厚,有炎症细胞浸润,80%(8/10)小鼠肺内可见肿瘤组织,且组织内血管丰富,充血,肿瘤细胞较正常细胞大,核大、深染,细胞数明显增多,细胞排列紊乱,极性消失。PT组,肺泡壁结构完整,偶有局部不连续,炎症细胞较少,20%(2/10)小鼠肺内可见肿瘤组织,组织内血管增生不明显,无明显血管充血。瘤细胞两组比较P=0.023,差异有统计学意义。5.抗炎治疗对乳腺癌肺转移的影响Cele组小鼠肺组织病理表现：肉眼观察,小鼠肺表面未见肿瘤结节；HE染色：肺泡壁结构完整,偶有局部不连续,炎症细胞较少,20%(2/10)小鼠肺内可见肿瘤组织。Cele组小鼠CD31抗体标记的红色血管密度明显比LT组小,血管结构清晰、规则,无扩张血管丛。结论1.LPS能促进细胞因子的表达及组织内炎性细胞的浸润。2.LPS诱导的炎症反应能促进乳腺癌的肺转移,抗炎治疗能抑制乳腺癌肺转移。