过继转移EAU的光学相干断层扫描表现

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目的本实验采用海德堡Spectralis光学相干断层扫描(Optical Coherence Tomography,OCT)对T细胞过继转移小鼠自身免疫性葡萄膜炎(Experimental Autoimmune Uveitis,EAU)模型的病情变化进行检测。通过OCT检测结果与临床评分、组织病理学及视网膜功能改变的对比分析,以及OCT对视网膜厚度(Retinal Thickness,RT)变化的测量,评估使用OCT动态监测小鼠过继转移EAU疾病的效果。方法1.建立过继转移EAU动物模型:过继转移IRBP1-20抗原特异性T淋巴细胞至C57BL/6小鼠建立过继转移EAU动物模型。2.临床观察:过继免疫后9d开始,每隔3天观察一次,观察至过继免疫后60d,间接检眼镜联合前置镜观察小鼠眼底炎症情况并进行评分。将病变分为发病初期、发病早期、高峰前期、高峰期、恢复期、末期,并根据Xu临床分级进行评分。3.组织病理学检查:在小鼠过继免疫后9、21、60天处死模型小鼠,制备视网膜病理组织切片,进行组织病理学观察,并根据Caspi病理分级进行评分。4.视网膜功能检测:在过继免疫后12、26、60天模型小鼠进行暗适应ERG检测,以评价视网膜功能的改变。5.OCT检查:过继免疫后9d开始,选取过继免疫后9d、11d、16d、21d、26d、30d、35d、40d、50d以及60d共10个时间点,采用海德堡Spectralis OCT仪进行观察,并测量距视盘边缘约1个视盘直径范围的RT。依据OCT检查结果将病变程度分为0~4.0分。结果1.成功建立过继转移小鼠EAU模型。2.EAU发病初期,视盘肿胀、边界不清以及轻微的视网膜水肿;随疾病进展,EAU发病早期,视网膜出现孤立的微小损伤;高峰前期视网膜组织出现线性损伤、视盘渗出以及血管白鞘;高峰期,玻璃体严重混浊;恢复期,组织浸润、视盘炎症和血管白鞘消退;末期,视网膜炎症基本完全消退,眼底可见灰色视网膜萎缩灶。相关性分析结果显示,OCT评分和眼底临床评分高度相关(r=0.9579,P<0.0001)。3.光学显微镜观察,发病初期以及发病早期玻璃体腔有少量炎症细胞浸润,视网膜结构相对正常;高峰前期视网膜水肿、玻璃体腔可见炎症细胞及视网膜结构紊乱;恢复期玻璃体腔可见极少量炎症细胞,视网膜萎缩变薄。4.过继免疫后9d、16d、21d、26d,分别为EAU发病初期、发病早期、高峰前期以及高峰期,OCT评分分别为0.35±0.24、1.4±0.52、2.8±0.42、3.6±0.52分;过继免疫后30d,处于恢复期,可见玻璃体炎症细胞减少,OCT评分平均为2.5±0.53分;过继免疫后60d,即EAU末期,玻璃体炎症细胞浸润消退,视网膜萎缩,RT降低,OCT评分0.5±0.53分。5.与临床观察的变化相同,随着病程的进展,可以观察到视网膜的厚度逐渐增加。在高峰期,由于炎症加重导致视网膜严重水肿,网膜厚度显著增加(大约为基线的1.5倍)。随后RT开始减少。在疾病末期,由于视网膜萎缩,尤其是感光细胞层的损伤,RT低于基线值。6.在过继免疫后7天,ERG振幅无变化。但是在过继免疫后12天,ERG振幅已有了显著变化,下降了15%左右,而此时EAU疾病刚处于发病初期。在疾病高峰期,ERG振幅下降了50%以上。在过继免疫后60天,处于疾病末期,炎症已消退,但是,ERG振幅仍未回到正常水平。结论1.OCT检查是一种高度敏感和可靠的技术,评价效果与临床评分、病理评价和ERG检测结果一致,可用于监测EAU疾病的发生发展。2.OCT小鼠EAU评分系统简单易行,可以对同一只动物病情进行动态活体监测。3.OCT通过对RT的测量,可对小鼠EAU模型进行半定量评价。
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