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近年来,我国结直肠癌发病率呈快速上升趋势,严重威胁着人们的生命健康。目前虽然治疗手段多样,但效果及预后欠佳。因此确定合理的治疗靶点,制定更为完善的治疗策略成为目前研究的热点问题。近年来,对肿瘤组织微血管密度(Microvessel Density,MVD)的定量研究表明,MVD与肿瘤的生长、转移和复发有着显著相关性。原癌基因(c-met)编码的蛋白产物c-Met是肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)的一个酪氨酸激酶受体,HGF/met信号系统有多种功能,能促进肿瘤组织的微血管形成和肿瘤细胞的增殖与分裂,c-Met蛋白的异常表达与肿瘤的发生、发展有着密切关系。结直肠癌组织中MVD与c-Met蛋白表达的相关性及其与临床病理特征关系的研究文献较少,本实验探讨了结直肠癌组织中MVD值与c-Met蛋白表达的相关性及与结直肠癌临床病理特征的关系。
目的:检测结直肠癌组织中c-Met蛋白表达情况并计数其MVD值,探讨两者之间的相互关系,评价其与结直肠癌临床病理特征的关系。
方法:
1.随机选取河北承德医学院附属医院病理科2009-2010年手术切除并经病理证实的结直肠癌标本40例、癌旁组织及正常结直肠粘膜组织各40例。标本离体30分钟内,一部分立即投入液氮后转入-80℃冰箱保存。另一部分经10%的福尔马林固定后,常规脱水,石蜡包埋。
2.应用Western blot法检测c-Met蛋白在正常结直肠组织、癌旁组织及结直肠癌组织中的表达差异并分析其与临床病理特征的关系。
3.应用免疫组化Sp(Streptavidin peorxidase)法检测正常结直肠组织、癌旁组织及结直肠癌组织中用单克隆抗体CD34标记的微血管,并计数微血管密度(MVD),探讨其与结直肠癌侵袭和转移的关系。
4.所有数据采用SPSS11.5统计学软件进行统计分析,实验结果以-x±s表示,两个独立样本组间均数比较用t检验,多组的组间比较用方差分析,p<0.05表示差异有显著性, p>0.05为差异无显著性。
结果:
1.c-Met蛋白在结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠组织中的表达我们用Western-Blot法检测40例结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠组织中c-Met蛋白的表达量分别为4.12±0.87,2.53±0.47,0.82±0.21,经统计学分析,c-Met蛋白在结直肠癌组织中表达最高,在癌旁组织及正常结直肠组织中表达量依次降低,三者之间c-Met蛋白表达情况的差异有显著性(p<0.01);将结直肠癌组织分别按肿瘤的侵及深度,淋巴结转移情况,分化程度和Dukes分期进行分类统计分析,发现c-Met蛋白在癌细胞侵及周围软组织的结直肠癌组织中表达高于未侵及周围软组织者(P<0.05);在有淋巴结转移的结直肠癌组织中表达高于无淋巴结转移者;Dukes(C+D)期的结直肠癌组织中c-Met蛋白表达高于Dukes(A+B)期,结果差异均有显著性(p<0.01);c-Met蛋白随着结直肠癌分化程度的降低,其表达水平升高,差异有显著性(p<0.05)。c-Met蛋白在不同年龄、性别、肿瘤部位的结直肠癌组织中的表达无统计学差异。
2.结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠组织中MVD的测定我们应用免疫组化Sp(Streptavidin peorxidase)法检测用单克隆抗体CD34标记的血管,并计数微血管密度(MVD)。结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠组织中的MVD值分别为33.85±8.68,30.00±7.81,12.80±4.09,结直肠癌组织中MVD值最高,在癌旁组织及正常结直肠组织中MVD值依次降低,三者具有统计学意义(P<0.01);将结直肠癌分别按肿瘤的侵及深度、淋巴结转移情况和Dukes分期进行分类统计分析,发现MVD值在侵及周围软组织的结直肠癌组织中高于未侵及周围软组织者(p<0.05);有淋巴结转移的结直肠癌组织中MVD值高于无淋巴结转移者;Dukes(C+D)期的结直肠癌组织中MVD值高于Dukes(A+B)期的结直肠癌组织中的MVD值,差异有显著性(p<0.01)。经统计学分析,在不同年龄、性别、肿瘤部位及分化程度的结直肠癌组织中的MVD值无统计学差异。
3.结直肠癌组织中c-Met蛋白的表达与微血管密度的关系我们对结直肠癌组织中c-Met蛋白的表达情况与微血管密度值进行相关性研究,经统计学处理,发现结直肠癌中c-Met蛋白的表达水平与癌组织中微血管密度值有正相关性(R=0.618p<0.01)。提示在结直肠癌组织中,随着c-Met蛋白表达水平的升高,微血管密度值也相应升高。
结论:
1.c-Met蛋白在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织及正常粘膜组织,c-Met蛋白的高表达与结直肠癌的临床分期、浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关。
2.结直肠癌组织中的MVD值高于癌旁组织及正常粘膜组织,且随着结直肠癌的进展,MVD值也呈增高趋势,提示肿瘤组织血管高度增生为其侵袭和转移提供了基础。
3.结直肠癌组织中c-Met蛋白的表达和MVD之间有显著相关性,推断在结直肠癌的浸润、转移过程中c-Met蛋白的高表达和MVD值上升存在协同关系。
4.联合检测c-Met、MVD有助于结直肠癌的临床评价及预后判断。