WFS1在猪卵母细胞成熟与植入前胚胎发育中的作用

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哺乳动物卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程受到多种复杂因子的调控。在这个过程中,内质网稳态的维持及调控对维护卵母细胞成熟及植入前胚胎正常发育至关重要。研究发现,Wolfram syndrome 1(WFS1)在多种细胞中调节内质网应激,维持内质网稳态过程中发挥着重要的作用。然而,WFS1在猪卵母细胞成熟和植入前胚胎发育中的作用仍然未知。本研究通功能分析,对WFS1在猪卵母细胞成熟和植入前胚胎发育中的表达模式及功能进行了研究,主要进行的工作和研究结果如下:(1)WFS1在猪卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程中的表达模式分别获取处于卵母细胞成熟各个时期的卵母细胞(GV期、GVBD期、MI期、MII期)及各个发育阶段的植入前胚胎(1细胞期、2细胞期、4细胞期、8细胞期和囊胚期)。通过免疫荧光观察方法发现WFS1在猪卵母细胞成熟及植入前胚胎各个发育阶段均有表达,随后通过q RT-PCR方法进一步分析发现WFS1m RNA相对表达水平在猪卵母细胞成熟的MI期及植入前胚胎的2细胞期、4细胞期最高。说明WFS1在猪卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程中发挥着重要作用。(2)WFS1在猪卵母细胞成熟过程中的作用本研究通过注射WFS1特异性抗体抑制其在猪卵母细胞中的活性,探讨了其对猪卵母细胞成熟的作用。研究结果发现,抑制WFS1活性后,猪卵母细胞第一极体排出率与对照组相比显著降低(p<0.01)。卵母细胞孤雌激活实验发现,猪卵母细胞中WFS1活性抑制后,孤雌激活胚胎卵裂率、囊胚形成率、囊胚直径、囊胚孵化率与对照组相比显著降低(p<0.05)。体外受精实验发现,猪卵母细胞中WFS1活性抑制后,显著降低猪卵母细胞与精子黏附能力、囊胚形成率及囊胚细胞总数(p<0.01)。进一步研究发现,WFS1活性抑制后导致猪卵母细胞抗氧化能力减弱,细胞内谷胱甘肽(GSH)相对水平显著减低(p<0.01),线粒体功能受到抑制,线粒体膜电位显著下降(p<0.01)和细胞内ATP相对水平显著降低(p<0.01),进而诱发卵母细胞的凋亡水平显著升高(p<0.01)及内质网应激水平提高,从而影响猪卵母细胞成熟进程及质量。(3)WFS1在猪植入前胚胎发育过程中的作用本研究通过注射WFS1特异性抗体抑制其在猪植入前胚胎中的活性,探讨了其对猪植入前胚胎发育的作用。研究结果发现,抑制WFS1活性后,猪植入前胚胎体外发育能力与对照组相比显著降低。WFS1活性抑制不仅降低了猪孤雌激活及体外受精胚胎卵裂率及囊胚形成率(p<0.05),也降低了猪孤雌激活囊胚形成质量(p<0.05)。进一步研究发现,WFS1活性抑制后导致猪植入前胚胎抗氧化能力减弱、线粒体功能受到抑制,表现为细胞内谷胱甘肽(GSH)相对水平显著减低(p<0.01)、线粒体膜电位显著下降(p<0.01)和细胞内ATP相对水平显著降低(p<0.01),进而诱发囊胚细胞凋亡水平增加(p<0.05)和细胞增殖能力减弱(p<0.01),发生内质网应激,从而影响猪植入前胚胎发育能力。综上所述,本研究通过抑制WFS1活性证明了其在猪卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程中的重要作用。这些关键科学问题的解决,有助于深入了解猪卵母细胞体外成熟和植入前胚胎体外发育过程中的重要事件和调控机制,充分挖掘动物胚胎资源提供理论线索。
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