论文部分内容阅读
本论文利用高效液相色谱系统分离纯化了4种鹅膏肽类毒素并运用质谱、紫外光谱等技术进行了结构鉴定,利用高效液相色谱技术对中毒病人体液中的α-amanitin进行了检测,同时对分离的3种肽类毒素进行了毒性分析。研究结果如下: 1.从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出了4种肽类毒素,并用环肽检测、紫外光谱和质谱对4种肽类毒素进行了初步鉴定,其中3种为三羟鹅膏毒肽(Amanin)、二羟鬼笔毒肽(PHD)、一羟鬼笔毒肽(PHN),另外1种的分子量为1145.4636Da,是否为新毒素需进一步确定。 2.3种肽类毒素的毒性分析结果如下:Amanin为慢作用毒素,对小白鼠的LD50为56μg·kg-1,小白鼠中毒死亡时间为3-7天,中毒后期能引起肝脏萎缩,同时能能显著抑制绿豆种子胚根的增长;PHD、PHN为快作用毒素,对小白鼠的LD50分别为2000μg·kg-1和1500μg·kg-1,小白鼠中毒死亡时间均为2-4小时,都能引起肝脏肿大充血,PHD能抑制绿豆种子胚根的伸长。 3.用ELISA方法对Amanin和PHD进行了生物活性筛选,结果表明:它们对PP1、PAI-1、CDC25、Cat-K和Cat-B无抑制作用。 4.建立了一种快速检测鹅膏菌中毒患者体液中的α-amanitin的方法。其回归方程为:Y=2349845.89X-18959.89 r=0.9958。其中X为进样量(μg),Y为峰面积,r为相关系数,进样在0.010~0.100μg的范围内与峰面积呈良好线性关系。并应用该方法临床检测了鹅膏中毒患者体液中的α-amanitin的含量,其含量范围是0.094μg·mL(-1)~0.489μg·mL-1。 5.对一起灰花纹鹅膏引起中毒的患者的肝功能实验综合指数(HIBT)进行了分析,其分析结果与临床症状吻合。