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目的:用Aβ1-42寡聚体和Aβ1-40单体两者混合物处理内皮细胞(hCMEC/D3),观察其对Aβ跨血脑屏障转运受体的影响并探讨1,25(OH)2D3对这种影响的保护作用。方法:(1)永生化人脑微血管内皮细胞体外培养并采用免疫细胞化学进行鉴定。(2)Aβ1-40和Aβ1-42肽溶液的制备,采用Western-Blot对Aβ1-42寡聚体进行鉴定。(3)MTT实验分别测定不同浓度Aβ1-40单体、Aβ1-42寡聚体、Aβ混合物以及1,25(OH)2D3对细胞的毒性作用,寻找Aβ制剂的亚毒性浓度以及筛选1,25(OH)2D3最佳药物浓度。(4)实验分组:(1)对照组:正常永生化人脑微血管内皮细胞;(2)Aβ混合物组:亚毒性浓度的Aβ1-40+Aβ1-42;(3)Aβ混合物+1,25(OH)2D3干预组:分别用Aβ混合物+低剂量1,25(OH)2D3、Aβ混合物+中剂量1,25(OH)2D3、Aβ混合物+高剂量1,25(OH)2D3处理细胞。(5)分别采用RT-PCR、Western-Blot检测各组低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRPl)、P-糖蛋白(P-gp)、晚期糖基化终末产物受体蛋白(RAGE)mRNA及蛋白水平的表达变化。结果:(1)经Western-Blot检测,显示本研究制备获得Aβ1-42寡聚体,且分子量以8-12kDa为主。(2)经MTT实验测定,选取细胞存活率在90%以上的Aβ制剂亚毒性浓度即Aβ1-42(25nM)+Aβ1-40(100nM);确定1,25(OH)2D3的最佳实验药物浓度为lnM,10nM,50nM。(3)Aβ混合物组RAGE mRNA及蛋白表达水平较对照组显著升高(P<0.01),1,25(OH)2D3低、中、高剂量干预组RAGE mRNA及蛋白表达水平均较Aβ混合物组下调(P<0.01);Aβ混合物组LRP1 mRNA及蛋白表达水平较对照组无统计学差异(P>0.05),1,25(OH)2D3低、中、高剂量干预组LRP1 mRNA及蛋白表达水平均较未添加1,25(OH)2D3的Aβ混合物组上调(P<0.01);Aβ混合物组P-gp mRNA及蛋白表达水平较对照组下调(P<0.01),1,25(OH)2D3低、中、高剂量干预组P-gp mRNA及蛋白表达与Aβ混合物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)可溶性Aβ混合物可调节血脑屏障内皮细胞上其自身转运受体RAGE、P-gp的表达,其结果可引发Aβ在脑中进一步累积。(2)1,25(OH)2D3可通过调节RAGE、LRP1转运受体的表达,可降低脑内Aβ水平而发挥其保护作用,1,25(OH)2D3可作为潜在的治疗或预防阿尔茨海默病的方法。