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目的:观察枇杷清肺饮加减治疗肺经风热型痤疮的临床疗效,采用网络药理学和体外细胞实验研究枇杷清肺饮通过MAPK/NF-k B信号通路调控LPS诱导Ha Ca T细胞炎性损伤机制。材料与方法:1.枇杷清肺饮加减治疗肺经风热型痤疮的临床疗效观察第一部分实验选取自2020年11月至2021年3月在辽宁中医药大学附属医院皮肤科门诊治疗的64例寻常性痤疮肺经风热型患者为研究对象。根据随机数字表法将患者分为A、B两组,每组各32例。A组给予临床常规治疗;B组给予临床常规治疗加枇杷清肺饮加减进行治疗。比较治疗前后两组患者的中医症候积分、痤疮皮损程度评分、临床疗效、复发情况及安全性。2.运用网络药理学探究枇杷清肺饮治疗痤疮的作用机制第二部分实验通过TCMSP数据库、Gene Cards,OMIM和TTD数据库,取枇杷清肺饮和痤疮交集靶点,使用STRING数据库建立PPI网络,DAVID数据库筛选靶点GO功能和KEGG通路富集分析,Cytoscape软件构建“活性成分-靶点-KEGG-痤疮”网络,预测其作用机制。3.基于MAPK/NF-k B信号通路探讨枇杷清肺饮调控Ha Ca T细胞炎性损伤作用机制第三部分实验采用细胞实验进行验证预测靶点的准确性,采用LPS诱导Ha Ca T细胞炎症模型,CCK8检测不同浓度枇杷清肺饮含药血清对细胞活力的影响,采用q PCR和ELISA技术检测Ha Ca T细胞IL-1β、AKR1B1、IL-4、TNF-α的m RNA及蛋白的表达水平,Western blot技术检测NF-k BP65、P38-MAPK和JNK-MAPK蛋白的表达水平。结果:1.枇杷清肺饮加减治疗肺经风热型痤疮的临床疗效观察对照组和实验组患者经过4周及6周的治疗后,中医证候及痤疮皮损情况较治疗前有明显改善(P<0.05)。治疗6周后,实验组对比对照组,两组的中医证候评分及痤疮皮损评分,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗结束后,实验组中痊愈4例,显效17例,有效6例,无效4例,临床总有效率87.1%,对照组痊愈1例,显效8例,有效12例,无效11例,总有效率65.6%,两组临床总有效率比较,差异具有统计学意义(X~2=4.01,P<0.05)治疗结束后随访2周,实验组的复发率为12.5%(4/32),明显低于对照组的22.58%(7/31),组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组一例出现服药后胃部不适,停药随访自行缓解。两组治疗后肝肾功能未见异常。2.运用网络药理学探究枇杷清肺饮治疗痤疮的作用机制TCMSP筛选出枇杷清肺饮主要活性化合物153个,潜在作用靶标304个;痤疮相关靶点1395个,与枇杷清肺饮交集靶点118个。蛋白PPI网络中含有118个节点。VEGFA(血管内皮生长因子A),IL4(白介素4),PTGS2(前列腺素内过氧化物合酶),TP53(P53基因),TNF(肿瘤坏死因子),EGFR(表皮生长因子受体),ESR1(雌激素受体1),AKR1B1(重组人醛糖还原酶)和IL1B(白介素1)这几个节点度值排名靠前。GO功能分析,得到GO条目1922条(P<0.05),其中生物过程条目(BP)条目为1750,细胞组成(CC)条目39个,分子功能(MF)条目133个,分别占比91.05%,2.03%,6.92%,BP条目中,排名前3为response to lipopolysaccharide(脂多糖应答反应)、steroid metabolic process(类固醇代谢过程)、response to molecule of bacterial origin(对细菌应激原分子的反应)。KEGG富集分析筛选到131条信号通路(P<0.05),分析这些通路发现,主要与炎症信号通路、细胞因子相互作用和癌症信号通路等有关,尤其是其中与痤疮关系密切的是PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路和NF-k B信号通路。3.基于MAPK/NF-k B信号通路探讨枇杷清肺饮调控Ha Ca T细胞炎性损伤作用机制与正常对照组细胞相比,LPS可显著上调Ha Ca T细胞IL-1β、AKR1B1、IL-4、TNF-αm RNA及蛋白的表达;与LPS诱导的Ha Ca T细胞相比,枇杷清肺饮可显著下调IL-1β、AKR1B1、IL-4、TNF-αm RNA及蛋白的表达。与正常对照组细胞相比,LPS可显著上调Ha Ca T细胞JNK、p-JNK、P38、p-P38、NF-k BP65的蛋白表达;与LPS诱导的Ha Ca T细胞相比,枇杷清肺饮含药血清可抑制P38-MAPK和JNK-MAPK的磷酸化,及NF-k BP65的蛋白表达。结论:1.枇杷清肺饮加减治疗肺经风热型痤疮的临床疗效观察枇杷清肺饮加减能够改善肺经风热型痤疮的中医证候以及皮损情况,临床疗效显著,复发率降低,用药安全性高。2.运用网络药理学探究枇杷清肺饮治疗痤疮的作用机制通过网络分析可得知,6种中药包含153个活性成分共304个靶标,与痤疮共有靶标基因118个,关键靶点涉及于IL-1β、IL-4、TNF-α、AKR1B1等;GO功能富集分析得到条目1922个(P<0.05);KEGG通路富集分析筛选到131条信号通路,其中与痤疮关系密切的是PI3K-Akt、MAPK、TNF信号通路和NF-k B信号通路。因此根据网络药理学结果选定IL-1β、AKR1B1、IL-4、TNF-α靶点蛋白,MAPK信号通路与NF-k B信号通路进行体外细胞实验研究。3.基于MAPK/NF-k B信号通路探讨枇杷清肺饮调控Ha Ca T细胞炎性损伤作用机制体外细胞实验结果显示,枇杷清肺饮能不同程度的抑制Ha Ca T细胞炎性模型中IL-1β、IL-4、TNF-α、AKR1B1m RNA及蛋白的表达,抑制P38-MAPK和JNK-MAPK的磷酸化,及NF-k BP65向细胞核内的转录。综上,枇杷清肺饮治疗肺经风热型痤疮临床疗效显著,具有明显的抗炎作用,其机制可能通过作用于IL-1β、IL-4、TNF-α、AKR1B1等靶点调节NF-k B和MAPK信号通路有关。