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IFN-λ是2003年发现的一类新的III型干扰素，有3个组成成员：IFN-λ1、IFN-λ2、IFN-λ3。它们通过IL-28Rα及IL-10Rβ构成的特异性受体复合物，发挥生物学效应。人体内，IFN-λ的3个功能性基因中，IFN-λ2与IFN-λ3序列高度相似，包括非编码的侧翼序列也极为相似，且与IFN-λ1启动子共享部分顺式作用元件，具有相同的调节模式。而小鼠体内只有IFN-λ2和IFN-λ3两个功能性基因，它们与人基因组中IFN-λ2和IFN-λ3基因序列高度保守。IFN-λ与膜受体复合物结合后，激活JAK-STAT信号通路，活化的STAT异源二聚体结合干扰素刺激反应元件(ISRE)调节干扰素刺激基因(ISGs)的表达；活化的STAT同源二聚体则结合IFN-γ激活序列元件(GAS)调节IFN-γ的表达。IFN-λ介导的信号通路与I型干扰素介导的信号通路极为相似，因此IFN-λ与IFN-α的生物学功能部分重叠。IFN-λ具有抗病毒功能，能抑制HBV、HCV等病毒在细胞内的复制；IFN-λ具有抗细胞增殖功能，也具有抗肿瘤的活性。IFN-λ参与免疫调节，介导Th1/Th2反应，调节免疫细胞活性，并参与变态反应性炎症性疾病的发生。本研究将利用原核表达技术大量表达并纯化IFN-λ蛋白，研究IFN-λ对ConA诱导小鼠肝细胞损伤的作用，并初步探究IFN-λ对肝癌细胞生长的影响。本论文研究方法：1.利用基因克隆技术，克隆IFN-λ基因，并将其插入到原核表达载体pET-44中，构建pET-44-IFN-λ原核表达质粒；2.将构建的pET-44-IFN-λ原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导其表达带有6×His tag的目的蛋白。对原核表达的目的蛋白产物进行可溶性分析，大量表达并纯化重组IFN-λ蛋白；3.建立Con A诱导小鼠肝损伤模型。ICR小鼠随机分为4组，分别为：①正常对照组（NS组）；②Con A+pcDNA3.1(+)组（ConA+CP组）；③Con A+pcDNA3.1(+)-IFN-λ3组（ConA+IFN-λ3组）；④Con A组。利用高压流体力学技术将pcDNA3.1-IFN-λ、pcDNA3.1(+)质粒注射入小鼠体内，通过HE染色检测小鼠肝组织病理变化，用real-time PCR检测相关细胞因子，研究IFN-λ对ConA诱导小鼠急性肝损伤的作用；4.检测肝癌HepG2细胞IFN-λ受体的表达，用不同浓度(0,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,500ng/mL,1000ng/mL)的IFN-λ处理HepG2细胞，MTS法检测IFN-λ对肝癌细胞增殖的影响；用不同浓度(0,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,500ng/mL,1000ng/mL)的IFN-λ处理HepG2细胞24h及48h，流式细胞术检测IFN-λ对肝癌细胞周期的影响。结果：1. PCR扩增IFN-λ3基因，并将其插入原核表达载体pET-44中，成功构建了pET-44-IFN-λ3原核表达质粒；2.转化有pET-44-IFN-λ3的大肠杆菌BL21(DE3)在1mM IPTG、20oC条件下诱导蛋白表达24h，利用Ni-NTA Agarose纯化大量表达的蛋白，得到纯度约为93%的IFN-λ3蛋白；3.与NS组相比，ConA+CP组、ConA+IFN-λ3组、Con A组肝脏组织肝小叶结构均有不同程度的破坏，且细胞有水肿，但ConA+IFN-λ3组肝小叶结构破坏更为严重，细胞可见坏死或凋亡；与NS组相比，ConA+CP组、ConA+IFN-λ3组、Con A组小鼠肝组织IFN-γ及TNF-α表达有显著差异，其中ConA+IFN-λ3组IFN-γ与TNF-α表达最高；与NS组相比，ConA+CP组、ConA+IFN-λ3组、Con A组小鼠肝组织IL-4和IL-12的表达均有显著差异，但ConA+IFN-λ3组与ConA+CP组、Con A组相比没有显著性差异；4.肝癌HepG2细胞表达IFN-λ受体IL-28Rα及IL-10Rβ。不同浓度(0,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,500ng/mL,1000ng/mL)的IFN-λ处理肝癌HepG2细胞，抑制HepG2细胞的增殖，但无剂量依赖和时间依赖；不同浓度(0,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,500ng/mL,1000ng/mL)的IFN-λ处理肝癌HepG2细胞，影响HepG2的细胞周期，使其阻滞在G1期，但无剂量依赖和时间依赖。本文结论：1.成功构建了原核表达载体pET-44-IFN-λ3；2.成功诱导IFN-λ3在原核细胞中表达，并纯化得到IFN-λ3蛋白；3. IFN-λ3参与Con A诱导的小鼠肝细胞损伤过程，加剧了细胞损伤，使肝细胞坏死或凋亡；其可能通过参与介导Th1反应，激活T细胞及巨噬细胞，上调IFN-γ及TNF-α的表达从而加剧炎症；4. IFN-λ1能抑制HepG2细胞的增殖，但无剂量依赖和时间依赖；能调节HepG2细胞的细胞周期，使细胞周期停滞在G1期。