弱毒菌株Vn-1诱导向日葵转录组分析及抗病基因功能验证

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:BenBenBenBen
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向日葵是世界第二大油料作物,目前在中国的栽培面积仅次于大豆和油菜,是第三大油料作物。它不仅具有观赏价值、药用价值,还具有非常重要的经济价值。中国是世界第四大向日葵种植国家,而内蒙古又是中国最大的向日葵种植省区。向日葵黄萎病是由大丽轮枝菌引起的世界性病害,现已成为我国向日葵上分布最广危害最重的病害。利用弱毒菌株防治植物病害受到研究者的重视,其具有无毒对环境无污染等优点。前期研究表明,来源不同的轮枝菌对向日葵在致病力上具有显著差异,并已证实弱毒菌株能增强向日葵对黄萎病的抗性。本研究进一步验证轮枝菌弱毒菌株增强向日葵抗黄萎病作用,并重点研究其抗性增强的分子机制,即通过转录组测序及生物信息学分析,筛选出抗病相关功能基因。并克隆抗病相关基因c DNA编码区全长,确定目标功能基因,再通过瞬时表达模式植物进行功能验证。本研究以弱毒菌株Vn-1为研究材料,通过对弱毒接种的向日葵根部组织进行转录组测序,测序结果用于转录组分析。结果表明,与对照组相比,Vn-1组中三种与氧化还原酶相关的GO功能条目显著富集。此外,还预测了33个抗性基因和160个易感基因。分析结果显示7种转录因子(TFs)、2种植物激素反应因子、2种E3泛素蛋白连接酶、2种CCR4相关因子和2种预测的富含亮氨酸重复序列(LRR)受体参与了向日葵抗黄萎病。我们从候选基因中优先筛选了4个抗性基因(Hann XRQ_Chr14g0444761、Hann XRQ_Chr04g0125131、Hann XRQ_Chr02g0053931、Hann XRQ_Chr03g0084521)进行了基因功能验证。通过In-Fusion构建了植物双元表达载体,并转化到农杆菌GV3101中,经叶片注射瞬时表达于本氏烟草中。在接种灰霉菌株SCDD2 48h后,分别对叶片进行相对病斑面积统计,结果显示转化抗性基因后,其相对病斑面积(71.05%、62.61%、69.31%、72.18%)均大于CK组(34.04%),表明4个抗性基因负调控烟草抗灰霉病菌;在接种致病疫霉Rye A 5d后,其相对病斑面积(1.03%、1.06%、5.14%、3.51%)显著低于CK组(67.15%),表明4个抗性基因正调控烟草抗致病疫霉病菌。本研究通过转录组数据分析以及基因功能验证,筛选出向日葵抗黄萎病的相关抗性基因,为后续全面研究相关抗病机制奠定理论基础,对向日葵抗病基因的研究具有重要意义。
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