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目的探讨Lnc RNA PIK3CD-AS1在肾癌细胞中的表达情况,以及PIK3CD-AS1对肾癌细胞增殖能力及其凋亡的影响,并探讨可能的分子作用机制。方法:运用实时荧光定量PCR检测Lnc RNA PIK3CD-AS1在正常肾脏细胞(HK-2)与多种肾癌细胞(769-P、786-O、A498)中的差异表达,通过构建PEGFP-N1-PIK3CD-AS1重组质粒,并将其转染入PIK3CD-AS1表达最低的肾癌细胞,构建稳定过表达PIK3CD-AS1的细胞株。通过增殖实验及凋亡实验检测过表达细胞的增殖能力及凋亡水平从而探讨PIK3CD-AS1对肾癌细胞增殖及凋亡的影响。通过细胞增殖或凋亡相关基因表达谱芯片筛选出与PIK3CD-AS1对肾癌细胞增殖或凋亡影响可能存在相互作用的基因。通过Western-blot检测PIK3CD-AS1高表达的细胞中p AKT蛋白含量的变化,进一步探讨PIK3CD-AS1具体作用机制的研究奠定基础。结果:与正常肾脏细胞HK-2相比较,Lnc RNA PIK3CD-AS1在多种肾癌细胞(769-P、786-O、A498)中表达量明显下降(P<0.05),其中在769-P细胞中下降最为明显(P<0.01)。成功构建PIK3CD-AS1过表达载体后,将其转染入769-P细胞再经G418药物筛选,成功得到PIK3CD-AS1稳定过表达的769-P细胞株,经实时荧光定量PCR验证,筛选后的769-P细胞株中PIK3CD-AS1表达量较阴性对照细胞明显增高(P<0.05)。通过增殖实验检测发现,PIK3CD-AS1高表达的细胞较阴性对照组细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率较阴性对照组细胞明显上升(P<0.01)。通过凋亡相关基因表达谱芯片,筛选与PIK3CD-AS1促凋亡能力相关性较大的基因,并通过Morpheus网页软件绘制热图,结合相关文献选取出三个基因(DFFA、BCL2L1、CASP9)进行多次验证,发现基因DFFA和BCL2L1在PIK3CD-AS1高表达细胞中的表达量较阴性对照明显降低(P<0.01),已有较多文献报道DFFA、BCL2L1基因可抑制细胞凋亡;同时基因CASP9的表达较阴性对照组细胞明显增高(P<0.01),较多文献报道CASP9可促进细胞凋亡。Western-blot结果显示上调PIK3CD-AS1的表达后,肾癌细胞中p AKT含量明显下降。讨论:通过我们的研究可以发现Lnc RNA PIK3CD-AS1很可能是一种抑癌因子,在多种肾癌细胞中表达普遍明显降低,并且发挥着抑制肾癌细胞增殖和促进凋亡的作用。其机制可能是PIK3CD-AS1影响p AKT蛋白的表达进而引起PI3K-AKT-m TOR信号通路的改变,使DFFA、BCL2L1、CASP9三种基因异常表达,以达到促进肾癌细胞凋亡作用,同时PI3K-AKT-m TOR信号通路的改变对肾癌细胞的增殖也有一定的影响。因此,Lnc RNA PIK3CD-AS1作为一种抑癌因子,很可能可以成为治疗肾癌的一个新的靶点。