柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:JC1220
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目的:研究中药柴黄清胰活血颗粒(Chai Huang Qing Yi Huo Xue Granule,CHG)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠的治疗作用,为柴黄清胰活血颗粒的临床运用和新药研究提供实验依据。方法:(1)动物分组:将144只成年健康雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组(sham-operation group,Sham),SAP模型组,柴黄清胰活血颗粒低、中、高剂量组(即CHG1、CHG2、CHG3),阳性对照清胰利胆颗粒组(Qing Yi Li Dan Granule,QYG),每组24只。(2)SAP造模:采用经十二指肠乳头逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠(Sodium taurocholate,STC)1ml/kg的方法制备大鼠SAP模型;假手术组开腹后仅翻动腹腔脏器后关腹。(3)药物配制:将柴黄清胰活血颗粒流浸膏以90℃蒸馏水溶解后,分别配制为0.04g/ml、0.08g/ml、0.16g/ml浓度的药液,清胰利胆颗粒用90℃蒸馏水溶解后配制为0.1g/ml浓度的药液,配制好的药液按大鼠体重计算,每次10ml/kg灌胃。(4)给药:待手术完成各组大鼠麻醉苏醒后,柴黄清胰活血颗粒低、中、高剂量组分别予以柴黄清胰活血颗粒流浸膏0.04g/ml、0.08g/ml、0.16g/ml浓度的药液灌胃,清胰利胆颗粒组予以清胰利胆颗粒0.1g/ml的药液灌胃,每次10ml/kg,每4小时1次,假手术组及SAP模型组灌胃等量生理盐水。所有大鼠术后禁食,自由饮水。(5)取材检测:术后12h、24h、48h共3个时间点,每个时间点每个组别各处死大鼠8只,开腹大体解剖观察后,采用注射器抽吸和无菌棉球吸拭相结合的方法收集腹水,并称量计重;腹腔动脉采血,用血细胞分析仪检测全血白细胞(white blood cell,WBC)计数,用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶(serum amylase,AMY)、血清脂肪酶(lipase,LIP)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酸激酶-同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血糖(blood glucose,GLU)、钙离子(calcium ion,Ca2+);采用双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α);完整取出胰腺组织,胰头部胰腺用天平称重,在60℃恒温干燥箱中干燥48h至胰腺体重不再改变后称重,计算胰腺干湿比;胰体部用4%中性甲醛浸泡24h后做石蜡包被切片,行苏木素-伊红(haematoxylin-eosin staining,HE)染色,在光镜下用Kusske评分法对胰腺病理组织进行双盲评分。结果:(1)与假手术组比较,SAP模型组大鼠大体解剖观察见胰腺组织体积变大,胰腺出现充血、水肿、出血、坏死,胰腺及肠系膜明显皂化斑,大量黄绿色或淡红色腹腔积液,胃肠积气、鼓胀、扩张,肠壁充血、水肿,腹腔脏器黏连。胰腺组织HE染色表现为胰腺结构紊乱,甚至严重破坏,腺泡水肿,小叶间隔增大,明显出血,大量坏死灶及炎细胞浸润。SAP模型组大鼠胰腺干湿比降低,胰腺组织病理评分升高,血清AMY、LIP活性增加,全血白细胞计数及血清CRP、TNF-α水平升高,钙离子浓度降低,血糖浓度升高,肝功能受损(AST、ALT活性升高),肾功能受损(BUN浓度升高),差异均有统计学意义(p<0.05),提示SAP模型大鼠造模成功。(2)与SAP模型组比较,柴黄清胰活血颗粒不同剂量组和清胰利胆颗粒组大体解剖观察见胰腺体积稍增大,出现充血、水肿及坏死改变,胰腺及周围少许皂化斑,大体改变跟SAP模型组相似,但病变程度较之减轻,尤其是柴黄清胰活血颗粒高剂量组,坏死范围小,散在分布,腹水量少。胰腺组织HE染色见胰腺结构基本正常,小叶间充血水肿,少量出血,局灶性坏死灶,少许炎细胞浸润。柴黄清胰活血颗粒不同剂量组和清胰利胆颗粒组能减轻胰腺水肿,改善胰腺组织病理评分,降低血清AMY、LIP活性,减少全血白细胞计数及血清CRP、TNF-α含量,升高钙离子浓度,降低血糖浓度,保护肝功能(AST、ALT活性降低)、肾功能(BUN浓度降低),与SAP模型组比较上述各指标差异均有统计学意义(p<0.05),提示柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠有治疗作用,且其疗效呈剂量依赖性。(3)与清胰利胆颗粒组比较,柴黄清胰活血颗粒高剂量组在降低腹水量,改善胰腺组织病理评分,减少全血白细胞计数及血清CRP、TNF-α含量,保护肝功能(AST、ALT活性降低)等方面,差异均有统计学意义(p<0.05),提示高剂量的柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用优于清胰利胆颗粒。结论:(1)柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠有治疗作用,且其疗效呈剂量依赖性。(2)高剂量的柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用优于清胰利胆颗粒。
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