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二化螟Chilo suppressalis (Walker)是我国水稻上的重要鳞翅目害虫,目前主要依靠化学药剂防治,随着化学农药的频繁使用,抗药性问题日益严重。Bt水稻的成功研发为二化螟防控提供了一种新型、安全和有效的方法。虽然Bt水稻在我国还未开始商业化种植,但研究靶标害虫对Bt水稻的潜在抗性风险和抗性机理非常必要。昆虫中肠既是主要的消化器官,也是外来不利因素(如毒素、农药、病原微生物等)的重要靶标,而且昆虫中肠BBMV受体的改变是Bt抗性产生的重要机理。因此,本研究采用双向电泳和质谱技术对二化螟幼虫的中肠蛋白质成分进行分离和鉴定,明确蛋白质的基本类别和功能；然后结合配体杂交技术,分离并鉴定了二化螟中肠BBMV中的Cry1Ab结合蛋白。本文的研究结果对于研究Cry1Ab毒素的作用机理及二化螟对Cry1Ab毒素的抗性机理可提供重要的方法和技术储备。1.二化螟幼虫中肠蛋白质组学分析通过双向电泳分离二化螟5龄期幼虫中肠蛋白得到300个左右的蛋白点,这些点主要分布在pI值5-8、分子量10-100kDa间的区域,酸性端的蛋白点数多于碱性端。从双向电泳图谱中选取较为明显的103个蛋白点,使用胰蛋白酶进行消化酶解,再通过基质辅助激光解析离子化飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,成功鉴定了71个蛋白点。鉴定获得的71个蛋白质分属于47种蛋白或蛋白组分,根据这些蛋白质在生物体内生理功能的不同,将它们归类为6种类型,分别为蛋白质代谢(Protein metabolism)类、碳水化合物代谢(Carbohydrate metabolism)类、能量代谢(Energy metabolism)类、营养贮存(Nutrition storge)类、肌肉组成(Muscle related)类及其它蛋白等。2.二化螟幼虫CrylAb结合蛋白的鉴定提取并分离了二化螟5龄幼虫中肠的BBMV蛋白,使用Biotin-CrylAb进行配体杂交后,对获得的结合蛋白点进行质谱鉴定。用Streptavidin-HRP对二化螟BBMV蛋白进行结合分析检测,发现二化螟BBMV蛋白中不含内源性的生物素蛋白。通过双向电泳和配体杂交技术获得25个结合蛋白点,这些点主要分布在40-100kDa之间。将双向电泳图谱和配体结合图谱进行匹配分析,对其中17个点进行质谱鉴定。鉴定获得的8种CrylAb毒素结合蛋白分别为肌动蛋白(Actin)、V-ATP酶亚基A(V-ATPase subunit A)、V-ATP酶亚基B(V-ATPase subunit B)、钙调蛋白(CALNUC)、 NADH-泛醌氧化还原酶75kDa亚基(NADH-ubiquinone oxidoreductase75kDa subunit)、ETF-泛醌氧化还原酶(ETF-ubiquinone oxidoreductase)、烯醇化酶(Enolase)和一种未知蛋白等。