促胰岛β细胞增殖中药的筛选和药效评价

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糖尿病(diabetes mellitus,DM)是由多种遗传和环境因素相互作用而引起的一组慢性代谢异常综合征。目前常用的口服降糖药有双胍类、磺脲类、噻磋烷二酮类等。这些化学降糖类药物尽管见效较快,但对肝、肾等脏器损害较大,甚至有发生低血糖的危险。一般这类抗高血糖药物仅仅只是降低异常升高的血糖,对于糖尿病患者起到治标不治本的作用。为此,本课题着眼于其病理基础之一“胰岛损伤”,特别是晚期糖尿病,胰岛细胞功能严重衰退,β细胞大量凋亡。针对这一点本课题建立了一个细胞水平上的药物筛选模型,从我国传统中药库中筛选出具有促进β细胞增殖,抑制其凋亡的药物。从而达到治标又治本的目的。且纯天然提取物类药物具有作用温和、毒副作用小等优点,开发利用潜力很大。首先,本论文以大鼠胰岛瘤细胞系RINm5f为基础材料,以GLP-1为阳性参照,用SRB法测定细胞生长曲线及增殖活性。确定了最佳细胞铺板浓度为104个/孔,阳性参照浓度50nmol/L,增殖率最高达30%。确定了中药样品的筛选浓度分别为100mg/L和10mg/L,最佳干预时间72小时,成功建立了体外药物筛选模型。并运用此模型对313味中药进行了初筛和复筛,筛选出蜈蚣、地龙两味中药具有促RINm5f细胞增殖的作用。然后,我们对活性药物进行初步分离。动物类药材蜈蚣,地龙采用水提醇沉方法,然后分别对各分离组分进行细胞活性评价。结果显示只有蜈蚣的50%乙醇醇沉上清组分对RINm5f细胞的生长有显著的促进作用,其他各组分都无显著促增殖活性的作用。最后,本论文选择促细胞增殖率相对较高的中药蜈蚣水提物进行了体内药效的评价。通过比较四氧嘧啶糖尿病小鼠服用蜈蚣水提物前后的生长情况,血糖值,胰岛β细胞修复情况等,初步考察中药蜈蚣水提物的降血糖功效。结果表明:蜈蚣水提物具有良好的体内降血糖功效。
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