心肌标志物荧光检测方法的建立

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近些年来,急性心肌梗死具有死亡率高及发病急等特点,已对人类健康产生重大的威胁。肌酸激酶同工酶(CK-MB)与肌红蛋白(Myo)是心肌细胞产生的重要心肌损伤有关标志物,对急性心肌梗死的诊断有着重要的临床意义。本研究利用荧光微球免疫分析方法对血液中的Myo以及CK-MB建立了定量检测分析方法,同时制备了定量检测试纸条。通过免疫层析技术与光致发光相结合,将一种单克隆抗体与荧光微球通过EDC与NHS进行偶联作成荧光标记物,将另一种对抗原不同作用靶点的抗体包被到NC膜上,最终两种单克隆抗体与样本中的目标被测物形成“三明治”的夹心结构,标记的荧光微球在紫外光激发波长为365 nm下发出红光,通过荧光定量检测仪测定相对荧光强度从而定量检测Myo以及CK-MB的含量。本文通过荧光微球标记及表征、原料的筛选、免疫层析试纸条的构建及优化以方法学评估等系列实验。结果显示Myo试纸条线性范围25 ng/ml~1500ng/ml,灵敏度为12.5ng/ml,CV<7%;CK-MB试纸条线性范围1 ng/ml~1000 ng/ml,灵敏度为1ng/ml,CV<8%。通过样本测试结果显示自制试纸条与购买的胶体金试纸条具有良好的相关性。但荧光试纸条定量,胶体金只能定性,而且荧光试纸条比较灵敏。本论文的实验结果为开发Myo以及CK-MB荧光检测方法及检测卡提供实验基础。
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