【摘 要】
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众所周知,Bcl-xl,Bax2和NF-κB参与抗凋亡反应。尽管在一些鱼中已经报道了Bcl-xl,但NF-κB介导的调节机制和细胞抗凋亡功能仍不清楚。本实验我们克隆了草鱼(Ctenopharyngodon
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众所周知,Bcl-xl,Bax2和NF-κB参与抗凋亡反应。尽管在一些鱼中已经报道了Bcl-xl,但NF-κB介导的调节机制和细胞抗凋亡功能仍不清楚。本实验我们克隆了草鱼(Ctenopharyngodon idella)Bcl-xl(CiBcl-xl)的全长cDNA序列及其启动子序列。CiBcl-xl的全长cDNA为2836bp,ORF为627bp,编码208个氨基酸的多肽。系统进化树分析显示CiBcl-xl与Dario rerio Bcl-xl(Dr Bcl-xl)具有高度同源性。在用poly I:C刺激后,CIK细胞和各组织中CiBcl-xl的表达显著上调,这说明CiBcl-xl在抗病毒免疫机制中有重要作用。之后为了进一步理解NF-κB对Bcl-xl的转录调控,在大肠杆菌BL21中大量表达CiC-rel和Cip65,并通过Ni-NTA His-Bind树脂的亲和层析纯化。在体外,凝胶阻滞实验分析证明了CiC-rel和Cip65与CiBcl-xl启动子的高亲和力。双荧光素酶报告基因检测显示CiC-rel和Cip65都能激活CiBcl-xl启动子。因此,与哺乳动物类似,鱼类C-rel和p65也可以上调Bcl-xl的转录。相反,敲降了C-rel或p65都能够降低Bcl-xl表达。我们还发现在草鱼肾细胞(CIK)中CiBcl-xl的过表达可以增加细胞活性并抵抗细胞凋亡,而Bax2的过表达后的功能恰好相反。同时,细胞中CiBcl-xl和CiBax2的共转染可以缓解细胞凋亡率。为了进一步研究Bcl-xl和Bax2协同作用的分子基础,我们进行了GST-Pulldown分析,并显示Bcl-xl和Bax2可以相互结合。我们的研究结果表明,基因Bcl-xl是NF-κB通路中下游的一个重要的抗凋亡基因。这为我们以后更深入的研究草鱼机体的凋亡机制提供了一个可参考的依据。
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