[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody的研制及在黑色素瘤中的显像研究

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目的:制备针对人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)受体的黑色素瘤显像剂[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody,并进行体内荷黑色素瘤(SK-MEL-28及A375)裸鼠的MicroPET显像和生物分布研究。方法:将Melan-A polyclonal antibody冻干粉制剂1.5mg溶于0.1M碳酸氢钠溶液lml中,于PD10柱及0.1M碳酸氢钠溶液纯化、洗脱、浓缩上述抗体原溶液,用0.1M碳酸氢钠溶液调节PH值=8.0,用2mg/ml DFO的DMSO溶液分批加入纯化浓缩后的抗体溶液中,置于36-C油浴中反应1h,合成Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody,通过PD10柱及0.15M PH=7.2的醋酸钠缓冲液,纯化浓缩。取3mCi 89Zr草酸钠溶液,加入适量的醋酸/醋酸钠溶液(调节PH值=7.0),在该反应体系中加入Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody,室温下反应40min后,PD10柱和醋酸/醋酸钠缓冲液分离、纯化,获得成品[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody,取样用iTLC分析其放化纯度及体外稳定性。建立SK-MEL-28及A375荷瘤裸鼠模型,进行[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody 的 microPET活体显像以及体内分布实验。结果:[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody标记率为54.75%,比活度约1.0mg/mCi,放化纯>95%。在体外37℃保温7d后性状基本稳定。microPET显像SK-MEL-28肿瘤部位呈放射性浓聚,肿瘤对药物的摄取值72h达峰值,6h、24h及72h的对药物的摄取值分别为8.75±0.91%ID/g、13.55±0.95%ID/g、 15.85±2.55%ID/g,肿瘤摄取可被高剂量的Melan-A polyclonal antibody特异性阻断。体内分布印证了microPET显像的结果,显示药物在血浆中清除较快,肝脏较肾脏代谢性摄取高。注射药物72h后肿瘤与肌肉、胰腺、肝脏的摄取比值为14.86、8.35、2.02。结论:[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A polyclonal antibody合成技术成熟,有较高的放化纯度,生物分布理想,有较佳的靶向性,为[89Zr]-Df-Bz-NCS-Melan-A monoclonal antibody体外标记提供前提基础,从而为PET早期诊断转移性黑色素瘤和评估生物靶向的治疗疗效提供了初步理论依据。
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