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p-乳球蛋白是引起婴幼儿过敏的主要过敏原蛋白之一,建立乳制品及其相关食品中β-乳球蛋白的检测体系对预防牛奶蛋白过敏具有重大现实意义,同时也为研究牛乳中过敏原量降低的程度奠定了良好的基础。以β-乳球蛋白为检测目标,建立了双抗夹心ELISA法和间接竞争ELISA法两种检测方法,并且对这两种方法的性能指标进行了比较。以p-乳球蛋白免疫日本大耳白兔,获得了兔抗p-乳球蛋白抗血清,效价达到128000,采用Protein A-Sepharose4B亲和层析纯化的抗体作为第一抗体,其浓度为3.03mg/mL,以常用的辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记抗体得到酶标抗体,经条件优化建立了抗体-抗原-酶标抗体的双抗夹心ELISA方法,确定了抗体包被浓度为0.5μg/well,酶标记抗体稀释度为1：8000；选择20℃,1h作为抗原抗体反应条件；检测限为0.038μg/mL,线性范围为0.047-1.50μg/mL,相关系数为0.9923；批内误差5.87%,批间误差8.88%。在p-乳球蛋白的间接竞争ELISA检测法中,确定了抗原包被浓度为0.5μg/mL,抗血清的最佳稀释度为1：12000,HRP-羊抗兔IgG工作浓度为1：10000；选择20℃,1h作为抗原抗体反应条件；在β-乳球蛋白浓度为0.06-1.92μg/mL的范围内具有良好线性,相关系数为0.9915；批内误差为5.03%,批间误差为5.78%。用α-乳白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、胶原蛋白、大豆蛋白、蛋白粉做抗体交叉反应,结果抗体和待测物的交叉反应率很低,表明所建立方法特异性强。用这两种检测方法对市售鲜牛奶、超高温灭菌奶、酸奶、调味酸奶中的p-乳球蛋白含量进行了检测。两种检测方法都特异性好,灵敏度高,具有较好的准确性和重复性。单从操作上来说,间接竞争ELISA法不需要制备酶标抗体,比双抗夹心ELISA法方便一些。