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第一部分Par3在结直肠癌组织中的表达及其临床病理学意义目的:研究极性蛋白Par3在结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)标本中的表达水平,并分析Par3表达水平与组织病理学特点的相关性。方法:收集武汉协和医院胃肠外科于2014年9月-2016年12月行手术治疗的CRC标本45例(包括癌组织和癌旁正常黏膜组织),借助qRT-PCR、WB和免疫组化技术IHC,检测Par3在CRC组织及其正常黏膜组织的表达水平,并分析其与患者年龄、性别、肿瘤TNM分期及肿瘤大小等病理学特征的相关性。最后,我们利用TCGA数据库提取的数据借助Kaplan-Meier方法分析Par3表达对CRC患者生存预后的影响。结果:qRT-PCR和WB检测发现,Par3在CRC标本中的表达水平低于相应的癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。IHC结果表明,与CRC组织相比,Par3在正常黏膜组织的表达显著升高(P<0.05)。相关性分析,Par3表达缺失与患者年龄、性别及肿瘤分化无相关性(P<0.05),而与肿瘤的T分期、N分期呈正相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,Par3表达降低病人,其5年总体生存率(overall survival,0S)及5年无病生存率(disease free survival,DFS)均明显低于Par3表达阳性者(P<0.05)。结论:Par3在CRC组织中的表达降低,并与肿瘤的T分期和N分期呈正相关性,而且不利于患者的生存预后。第二部分Par3对结直肠癌细胞系恶性生物学行为的影响目的:研究极性蛋白Par3对CRC细胞系增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:利用sh-Par3慢病毒转染SW480和HCT116细胞,建立Par3表达沉默稳转细胞株。再利用CCK8增殖实验、平板克隆、Transwell实验、血管形成实验及裸鼠成瘤等实验技术,研究Par3对CRC细胞恶性生物学行为的影响。结果:WB和qRT-PCR结果显示,sh-Par3可明显降低SW480和HCT116细胞中Par3的表达。CCK8、体外平板克隆实验及体内裸鼠成瘤实验结果表明,Par3表达降低可明显促进CRC细胞的增殖(P<0.05)。Transwell实验及裸鼠肺转移模型研究显示,Par3表达降低可显著促进CRC细胞的迁移及侵袭转移能力(P<0.05)。另外,我们通过体内外实验表明,Par3失活可促进肿瘤的血管形成(P<0.05)。结论:Par3表达缺失可明显促进CRC细胞的增殖、血管形成、迁移及转移能力。第三部分Par3通过MYH9调控结直肠癌细胞恶性行为的机制研究目的:探索Par3调控CRC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:通过sh-Par:3慢病毒转染CRC细胞系SW480和HCT116,再借助WB、Co-IP和qRT-PCR检测Par3表达降低对MYH9表达的影响。然后用siMYH9转染Par3表达降低的稳转细胞株,再利用CCK8、平板克隆、Transwell及免疫荧光等技术研究Par3/MYH9通路对CRC细胞增殖及迁移侵袭能力的影响及其分子机制。结果:在SW480和HCT116细胞中,Par3表达缺失可明显上调MYH9表达(P<0.05),同时Co-IP结果显示,Par3与MYH9可结合形成复合物发挥作用。CCK8及平板克隆实验结果显示,siMYH9可消除Par3沉默引起的细胞增殖能力增加(P<0.05)。Transwell结果显示,干扰MYH9可明显抑制细胞的迁移及侵袭能力(R<0.05)。WB及免疫荧光结果显示,下调Par3可通过上调MYH9介导细胞紧密连接蛋白Zo-1的表达降低,并可促进Stat3的表达及磷酸化。结论:Par3表达缺失可通过上调MYH9促进CRC细胞的增殖、迁移及侵袭能力。同时,Par3/MYH9复合物可调控细胞TJ的形成及Stat3活性参与CRC细胞恶性行为的发展。