论文部分内容阅读
目的：通过红芪水提物对ALI大鼠的作用，观察红芪水提物对ALI大鼠肺组织形态的影响，并进一步观察红芪水提物对ALI大鼠免疫功能及NF-κBp65信号通路的影响，探讨其对ALI的治疗作用及相关机制，为临床应用红芪治疗ALI提供实验依据。方法：60只SPF级Wistar大鼠，体重180~220g，雌雄各半，用随机数字表法分为正常对照组10只和造模组50只。造模组腹腔注射内毒素(LPS)5ml·kg-1诱导ALI模型。造膜成功后同法随机分为：模型组（M组）、红芪水提物治疗组（高、中、低剂量组）、阳性对照组（地塞米松组，DEX组），每组10只。造模4h后，红芪水提物高、中、低剂量组大鼠分别以红芪煎剂5.2g·kg-1、2.6g·kg-1、1.3g·kg-1灌胃，DEX组大鼠每只按0.01g·kg-1灌胃，NS组与M组大鼠以等容量NS灌胃，1次·d-1，连续3d。末次给药后24h脱颈处死所有大鼠，取肺称重。取左肺称重后，60℃干燥，48h，称重；取右肺中叶肺组织，4%甲醛固定，石蜡包埋，连续切4μm厚切片。其余肺组织-80℃冰箱保存备用。计算肺系数（LI）、左肺的湿/干重比(W/D)及肺的含水率；利用光学显微镜观察肺组织病理形态学改变；用免疫组化SP法检测TNF-α和IL-10蛋白的表达；采用实时荧光定量PCR检测肺组织中NF-κBp65（rela）mRNA、mapk14mRNA的表达。结果：（1）内毒素造膜后大鼠出现呼吸加深加快、毛发直立、弓背、口唇发绀、呛咳、精神萎靡、不思饮食等症状，表示造模成功。（2）M组大鼠LI、W/D及肺含水率升高，NS组、红芪水提物高、中、低剂量组及DEX组LI、W/D及肺含水率降低。（3）光镜下NS组肺泡结构清晰，无明显炎性细胞浸润和渗出；M组可见肺灶性出血，肺间质水肿，肺泡壁增厚，部分肺泡萎陷，血管及支气管周围大量炎细胞浸润；DEX组肺组织结构较清晰，破坏较轻，肺充血水肿减轻，炎细胞浸润现象明显减轻或者消失；红芪水提物高剂量组肺组织结构清晰，肺泡间隔变窄，红细胞及中性粒细胞渗出减轻，肺组织病理损伤明显改善；红芪水提物中、低剂量组大鼠肺泡腔内出血水肿程度及肺泡腔内炎症细胞数量低于M组。（4）M组肺组织TNF-α蛋白表达水平明显升高；用药各组TNF-α蛋白表达水平明显下降；DEX组与红芪水提物低剂量组疗效相当；红芪水提物高、中剂量组治疗效果优于低剂量组。（5）M组肺组织IL-10蛋白表达水平下降；用药各组肺组织IL-10蛋白表达水平升高；红芪水提物高、中剂量组与DEX组肺组织IL-10蛋白表达水平相当。（6）M组NF-κBp65（rela）mRNA、mapk14mRNA的表达量明显升高；用药各组肺组织NF-κBp65（rela）mRNA、mapk14mRNA的表达量明显下降。结论：1.红芪水提物各治疗组能够改善ALI大鼠肺水肿、出血等组织形态学改变，明显降低ALI大鼠LI、W/D及肺的含水率；2.红芪水提物高、中剂量组能够明显抑制ALI大鼠肺组织TNF-α蛋白的表达，同时促进IL-10蛋白的表达；3.红芪水提物治疗组能够抑制NF-κBp65（rela）mRNA、mapk14mRNA基因在肺组织中的表达。提示红芪对大鼠ALI的保护作用可能是通过抑制TNF-α等前炎性因子的释放和增强IL-10等抗炎因子的表达，抑制了p38MAPKs信号通路在肺内的激活，从而阻止了NF-κB信号通路的活化而实现的。