T细胞耗竭在细胞免疫治疗中的作用及机制研究

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目的:肿瘤免疫治疗的应用,不仅为血液肿瘤的治疗提供新的方法,也极大地改善了患者的生存期。许多临床前和临床试验证实,造血干细胞移植(HSCT)后使用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)不仅可以增强HSCT的抗肿瘤作用和预防复发,还可以降低移植物抗宿主病(GVHD)的发生率。在此基础上,本研究探讨不同白血病来源CIK细胞在抗肿瘤效应中的作用,以及在抗肿瘤效应中起作用的成分及其作用机制,进而拓展其应用,以及辅助其他免疫治疗。方法:通过临床应用,我们收集了关于造血干细胞移植后应用CIK细胞治疗的患者的信息,并建立了描述CIK细胞变化的体外模型。利用流式细胞术检测CIK细胞培养前后,表面分子标志的变化,从何反映CIK细胞培养过程中的细胞类型变化。并通过分选出培养前后,主要变化的细胞,通过基因测序技术,找出其中变化的关键分子,Real-time PCR验证这些关键分子在CIK细胞培养前后的指标在mRNA水平变化,以探究CIK细胞作用机制。结果:造血干细胞移植后应用CIK细胞治疗的患者,其疾病状态均有所改善。通过流式细胞术检测发现,CIK细胞培养过程中CD3+CD56+T细胞比例升高,耗竭指标CD56+TIM-3+T细胞比例降低。而CD3+CD56+T细胞是CIK细胞发挥作用的主要细胞成分,因此,我们通过分选出培养前后的CD3+CD56+T细胞,通过表达谱测序,找出发生变化关键分子ELANE、SERPINA1、CD177、CD300A。Real-time PCR验证发现,在CIK细胞培养前后,ELANE在mRNA水平的变化具有统计学意义。我们发现在CIK细胞中,T细胞功能的变化主要是耗尽的T细胞的变化。因此过继免疫疗法的关键是T细胞耗竭逆转,改善了T细胞功能,从而达到抑制GVHD及抗肿瘤效应。结论:过继免疫疗法CIK输注具有抑制GVHD及抗肿瘤效应。流式细胞术证实CIK细胞变化主要是CD3+CD56+T细胞的变化,而且CIK有效性的关键是T细胞耗竭状态的逆转,从而改善了T细胞功能,使其发挥上述效应。耗竭T细胞功能变化的关键是ELANE基因表达的差异。
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