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抑制素A能通过垂体-性腺轴负反馈调节垂体合成和分泌的促卵泡素(Follicle-stimulating Hormone,FSH),进而调节卵泡的发育。因此,抑制素在调控卵泡发育、生殖激素合成与分泌以及调节细胞增殖等方面具有重要调控作用。以往关于抑制素的研究主要集中在抑制素对FSH分泌的调节作用,但是外源FSH处理对牛卵巢抑制素合成和分泌的影响尚不清楚。因此,本试验一通过牛体外有腔卵泡培养模型,研究不同直径卵泡中抑制素基因的表达规律以及不同浓度梯度FSH处理对牛卵巢抑制素合成和分泌的影响。此外,曾有研究报道,抑制素在调节猪卵泡颗粒细胞增殖方面也发挥着至关重要的作用,但是抑制素对牛卵泡颗粒细胞增殖的作用尚不清楚。因此,试验二通过不同浓度梯度抑制素A体外处理牛卵泡颗粒细胞,研究其对颗粒细胞增殖的影响。试验研究内容和结果如下:试验按照卵泡直径分离获得屠宰场卵巢的大中小(9-11、5-8、≤4 mm)有腔卵泡,体外采集其颗粒细胞和卵泡液,分别通过荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测了不同直径卵泡颗粒细胞中抑制素基因的表达水平和卵泡液中促性腺激素(FSH和LH)的浓度。荧光定量PCR结果表明大卵泡颗粒细胞中抑制素α(INHα)和抑制素βA(INHβA)的表达水平显著高于小卵泡(P<0.05),而大卵泡膜细胞中INHα的表达水平却显著低于小卵泡(P<0.05);ELISA结果表明大中小卵泡卵泡液中FSH和LH的浓度无显著差异(P>0.05)。通过体外有腔卵泡培养模型,试验还研究了不同浓度梯度的外源FSH(0、1、10、25和50 ng/mL)处理对体外培养的大卵泡(9-11mm)颗粒细胞中抑制素基因表达水平的影响,结果表明FSH处理显著下调牛卵泡颗粒细胞中INHβA和抑制素βB(INHβB)表达水平(P<0.05)。为进一步研究抑制素A(INHA)对颗粒细胞功能,尤其是对颗粒细胞增殖的影响,试验通过不同浓度梯度的外源INHA(0、20、50和100 ng/mL)处理体外培养的牛颗粒细胞,研究其对颗粒细胞增殖的影响及其分子机制。结果表明高浓度INHA(50和100 ng/mL)可显著提高体外培养牛颗粒细胞的活性(P<0.05),而100ng/mL INHA可通过增加S期细胞数、显著上调PCNA和CyclinB1基因表达促进牛卵泡颗粒细胞增殖(P<0.05),并通过显著下调Bax和Caspase-3基因的表达抑制颗粒细胞的凋亡(P<0.05)。综上所述,外源FSH可直接调控牛卵泡颗粒细胞抑制素基因的表达水平,而体外添加高浓度抑制素A能促进牛卵泡颗粒细胞的增殖,并降低其凋亡率。