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目的： 1．建立大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的体外培养方法。 2．研究重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(rAAV-GFP)对体外培养的大鼠RGCs的转染效率和毒性。 3．探讨应用重组腺伴随病毒载体介导的脑源性生长因子基因(rAAV-BDNF)和神经营养素4基因(rAAV-NT4)能否对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)进行转染，检测外源性BDNF基因和NT4在细胞内转录水平和翻译水平的表达。 4．判断rAAV-BDNF和rAAV-NT4转染后对RGCs生长活性和凋亡的影响。 方法： 1．取出生24小时内的S-D乳鼠的视网膜神经上皮层，胰酶消化，应用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基，培养器皿预先用0.1mg／mL多聚赖氨酸(PLL)包被，培养24小时后，加入5-溴-2’-脱氧尿苷(20μg／mL)。培养过程中坚持不换液。 2．应用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体和PE-Thy1.1抗体进行鉴定，同时应用流式细胞学方法检测PE-Thy1.1抗体标记阳性细胞的比例。 3．细胞培养2d后，按转染倍数(MOI)为10~1～10~5转染RGCs；5d后行流式细胞仪检测不同MOI的rAAV-GFP对混合培养的RGCs的转染效率。应用MTT比色方法检测并比较各组细胞的生长活性。 4．分别应用rAAV-BDNF和rAAV-NT4转染培养2天的RGCs，MOI=10~5，继续培养7天。应用RT-PCR技术检测BDNF和NT4基因在细胞中mRNA水平的表达。 5．分别在rAAV-BDNF和rAAV-NT4转染7天和14天后收集细胞培养液，应用ELISA方法对每组培养液中的BDNF含量进行检测。 6．分别在rAAV-BDNF或rAAV-NT4转染后3、6和9天时，对转染细胞、未转染细胞进行MTT比色分析，比较不同组的细胞生长活性。 7．转染7天后，应用Annexin V-FITC凋亡试剂盒和流式细胞仪，检测rAAV-BDNF