【摘 要】
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eryF基因编码红霉素C-6羟化酶，本论文通过框架内失活方法将此基因阻断，使红霉素C-6位不能羟基化，从而产生C-6位脱羟基红霉素。 通过PCR方法删除了eryF基因内部144bp，成功构建
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eryF基因编码红霉素C-6羟化酶，本论文通过框架内失活方法将此基因阻断，使红霉素C-6位不能羟基化，从而产生C-6位脱羟基红霉素。
通过PCR方法删除了eryF基因内部144bp，成功构建了以质粒pHZ132为载体的阻断质粒pSPU261，但此载体无法通过接合转移的方式转入红霉素产生菌——糖多孢红霉菌中，构建了以质粒pSETl52作为载体的阻断质粒pSPU263并成功转入糖多孢红霉菌中。共得到转化子279株，挑选14株通过PCR筛选得到单交换菌株C6，F3，J8，其它为发生随机整合菌株。单交换菌株经过无药传4代后，共点种1840株，筛选到6株安普霉素抗性敏感的菌株，PCR、酶切验证此6株敏感菌株中F3-1014，F3-1018，F3-1110，J8-760为双交换菌株，F3-125，J8-251发生了回复突变，挑选F3-1110双交换阻断菌株经测序结果正确。
阻断菌株F3-1110经发酵，提取，薄层分析(TLC)表明其主要组分与出发菌株红霉素A、B、C、D相比发生明显变化，将4条主组分带刮板，浸泡浓缩后质谱(MS)分析，此4种组分与红霉素A、B、C、D相比分子量对应小16，即阻断株发酵产物由出发菌株中的红霉素A、B、C、D转变成脱羟基红霉素A、B、C、D，成功阻断了eryF基因，但是其效价远远低于出发菌株。
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