【摘 要】
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目的检测肿瘤细胞株叶酸受体的表达,以此作为肿瘤靶标,以GFP和luciferase作为报告基因,探讨其靶向肿瘤细胞siRNA的干扰效应。方法1.以FITC标记的folate-pRNA作为检测分子,采
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目的检测肿瘤细胞株叶酸受体的表达,以此作为肿瘤靶标,以GFP和luciferase作为报告基因,探讨其靶向肿瘤细胞siRNA的干扰效应。方法1.以FITC标记的folate-pRNA作为检测分子,采用流式细胞术和倒置荧光显微术,检测肿瘤细胞株叶酸受体的表达;2.通过脂质体技术共转染pGL3-control, pRL-TK和pRNA/siRNA(luciferase),研究其对萤光素酶的干扰效应,并以pRNA/siRNA(GFP)设为对照组;3.通过脂质体技术共转染pEGFP-N2和pRNA/siRNA(GFP),研究其对GFP的干扰效应,并以pRNA/siRNA(luciferase)设为对照组;4.体外将folate-pRNA与pRNA/siRNA(luciferase)混合形成纳米颗粒,与细胞共孵育,通过双萤光素酶报告检测系统测定萤光素酶的活性。结果1.FCM检测结果表明,25种肿瘤细胞株中,01和02细胞株表面高表达叶酸受体;2.报告基因载体与siRNA载体共转染实验表明,转染pRNA/siRNA(luciferase)可明显降低萤光素酶的活性,对GFP表达无影响;而转染pRNA/siRNA(GFP)可显著抑制转染细胞GFP的表达,对luciferase的表达无明显影响;表明siRNA干扰具有特异性;3.通过folate-pRNA与pRNA/siRNA(luciferase)形成的纳米颗粒能直接进入细胞,靶向胞内的siRNA可发挥特异性干扰效应。结论通过脂质体转染siRNA可特异性干扰胞内基因的表达,某些肿瘤细胞可高表达叶酸受体,以此作为肿瘤特异性靶标,以其pRNA为靶向分子,靶向的pRNA/siRNA能诱导特异性干扰报告基因的表达效应,为其靶向基因治疗研究奠定了基础。
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