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目的:1、通过检测外伤性癫痫患者术后脑组织中的NA+-K+-2CL-转运体(NKCC1)、K+-CL-转运体(KCC2)及m TOR通路信号蛋白4E结合蛋白1(4E-bingding protein 1,4E-BP1)的表达量及相对m RNA水平,探讨NKCC1、KCC2及m TOR通路信号蛋白4E-BP1在外伤性癫痫(Post-traumatic epilepsy,PTE)中的表达及临床意义。2、通过观察氯化亚铁皮层注射诱导外伤性癫痫大鼠模型损伤灶周围皮层NKCC1、KCC2及m TOR通路信号蛋白4E-BP1的表达,并以m TOR抑制剂雷帕霉素进行干预,对比NKCC1、KCC2及4E-BP1的表达变化,探讨PTE可能的发病机制。方法:1、收集2010年1月-2015年12月期间我院神经外科外伤性癫痫患者术后脑组织标本14例作为实验组;选取脑外伤患者行减压或清创手术获取的和各种病变患者手术入路不可避免要切除的正常脑组织8例作为对照组。Western blot检测NKCC1、KCC2及4E-BP1蛋白的表达情况,RT-CPR检测NKCC1、KCC2及4E-BP1m RNA表达改变。2、健康成年雄性SD大鼠60只(清洁级)。随机分为以下组别:生理盐水对照组(A组,16只)、雷帕霉素治疗组(B组,22只)和载体治疗组(C组,22只)。B、C两组大鼠通过皮层注射氯化亚铁(0.1mol/L,10u L)制作PTE模型,生理盐水对照组皮层注射等体积生理盐水。雷帕霉素治疗组在造模后腹腔注射稀释于5%Tween80,5%PEG400和4%乙醇的雷帕霉素溶液(6mg/kg/d);载体治疗组于同一时间腹腔注射等体积的不含雷帕霉素的载体溶液。根据Racine分级评定发作情况,并对比各组之间大鼠癫痫发作情况。在1W后取脑,分别行HE染色、抗NKCC1、KCC2、4E-BP1酶标免疫组织化学染色、Western blot蛋白定量。结果:1、Western blot显示外伤性癫痫病灶脑组织中4E-BP1、NKCC1相对灰度值较正常脑组织升高,KCC2相对灰度值较正常脑组织降低;外伤性癫痫病灶脑组织中NKCC1与KCC2相对灰度值的比值较正常脑组织升高。差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示外伤性癫痫病灶脑组织中4E-BP1、NKCC1的相对m RNA含量较正常脑组织升高,KCC2相对m RNA含量较正常脑组织降低;外伤性癫痫病灶脑组织中NKCC1与KCC2相对m RNA含量的比值较正常脑组织升高。差异具有统计学意义(P<0.05)。2、共造模成功40只,其中造模成功后1W内死亡6只,最终成功存活34只,造模成功率85%。免疫组织化学染色显示:NKCC1、KCC2及4E-BP1均主要表达于胞浆。与生理盐水对照组相比,癫痫模型组和载体治疗组中NKCC1、4E-BP1表达强度升高,KCC2强度降低。与载体治疗组相比,雷帕霉素治疗组NKCC1、4E-BP1表达强度下降,KCC2表达强度升高(P<0.05)。Western blot结果显示:与生理盐水对照组相比,癫痫模型组和载体治疗组NKCC1、4E-BP1相对灰度值升高,KCC2相对灰度值降低,且NKCC1与KCC2相对灰度值的比值升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与载体治疗组相比,雷帕霉素治疗组NKCC1、4E-BP1相对灰度值下降,KCC2相对灰度值升高,且NKCC1与KCC2相对灰度值的比值升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、NKCC1、KCC2和m TOR通路信号蛋白4E-BP1的异常改变,可能是外伤后脑组织组织学改变及反复癫痫发作的重要分子机制。2、Fe Cl2诱导的PTE大鼠模型的损伤灶周围皮质出现NKCC1、KCC2和4E-BP1的异常表达,该异常表达可被m TOR抑制剂雷帕霉素抑制。m TOR通路可能通过调控下游表达因子4E-BP1来调节NKCC1、KCC2的表达,从而参与该模型中PTE形成。