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目的:探讨系统应用牙龈间充质干细胞对骨质疏松大鼠种植体骨结合的影响,为促进种植体的骨结合提供一条崭新的思路。方法:1、酶解法培养GFP+C57/BL转基因小鼠牙龈间充质干细胞(gingiva-derived mesenchymal stem cells, GMSCs),流式检测细胞表面标记物,同时进行成骨诱导及上皮样细胞诱导。2、去势法建立骨质疏松模型:3月龄纯种wistar雌性正常大鼠为对照组,摘除双侧卵巢的3月龄纯种wistar雌性大鼠为实验组。术后3个月处死各组大鼠,通过测定血清碱性磷酸酶及组织HE染色鉴定模型是否成功建立。3、取63只3月龄纯种wistar雌性大鼠随机分为3组:A组(正常+PBS)(n=21):种植术前30分钟尾静脉注入PBS; B组(去势+PBS) (n=21):去势术后3个月,种植术前30分钟尾静脉注入PBS; C组(去势+GMSCs) (n=21):去势术后3个月,种植术前30分钟尾静脉注入GMSCs悬液。4、各组大鼠均全麻下于双侧股骨远心端植入种植体,种植术后1周、4周、8周各组分别处死6只大鼠,采用荧光定量PCR (relative fluorescence quantitative polymerase chain-reaction, RT-PCR)检测种植体周围骨组织成骨相关基因及炎症因子的表达;采用硬组织切片亚甲基蓝-酸性品红染色检测种植骨结合率;于4周各组另处死3只大鼠通过免疫组化及DAPI染色检测GFP+GMSCs归巢。结果:1、成功培养C57/BL小鼠GMSCs,为长梭形,典型成纤维细胞形态,GFP表达阳性且稳定。流式细胞术榆测结果:GMSCs表达CD29 (99.9%)、CD44 (92.6%),不表达CD34 (5.1%)、CD31 (4%)、CD45 (0.8%)、CDllb (1.5%)。成骨诱导液诱导28天后镜下可见钙化结节,茜素红染色后结节呈红褐色;上皮样细胞诱导液诱导14天后可见细胞形态明显改变,似铺路石样。2、成功建立wistar大鼠骨质疏松模型,实验组大鼠血清中碱性磷酸酶活性明显高于对照组,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色表明:实验组与对照组相比股骨骨小梁数目减少,部分骨小梁变细断裂,不连续,骨髓腔变大。3、检测种植体周围组织成骨相关基因及炎性因子表达术后1周:A组、C组与B组相比,BSP表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05); OPN表达上调, A、B两组间差异有统计学意义(P<0.05),B、C两组间差异无统计学意义(P>0.05);IL-1表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后4周:A组、C组与B组相比,BSP、OPN表达上调,IL-1表达下调,且差异均有统计学意义(P<0.05)。术后8周:A组、C组与B组相比,BSP表达略上调,差异均无统计学意义(P>0.05); OPN表达上调,IL-1表达下调,且均有统计学意义(P<0.05)。4、1周、4周、8周硬组织切片结果显示A组、C组种植体骨结合率高于B组,1周时B组和C组间差异无统计学意义(P>0.05),其余均有统计学意义(P<0.05)。5、4周组织石蜡切片免疫组化及DAPI染色后,种植体周围组织可见GFP+细胞归巢。结论:1、酶解法分离培养GFP+牙龈间充质干细胞操作简便,传代2-3次后细胞纯度较高,GFP表达稳定。牙龈间充质干细胞有成骨向分化及成上皮样细胞分化的潜能。2、通过去势法可成功建立骨质疏松模型。3、系统应用GMSCs,可在种植体周围新生组织中检测到GFP+GMSCs的归巢,并部分分化为成骨细胞参与新生骨的形成,促进种植体的骨结合。