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猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的接触性高致病性传染病。各个年龄阶段猪都能够感染PEDV,其中新生仔猪最为易感,发病率和死亡率均高达100%。流行病学调查显示,我国29个省市自治区PEDV阳性率为61.10%～78.49%,猪场阳性率为71.43%～83.47%。PED已经严重影响我国养猪业的发展。根据S基因遗传差异,PEDV可分为2个亚群,经典毒株G1亚群和大流行毒株G2亚群。我国普遍使用的疫苗为基于TGEV和PEDV经典毒株CV777所研制的灭活二联苗。2010年底,中国暴发G2亚群PEDV,CV777灭活疫苗无法提供完全保护。目前,已开发G2亚群PEDV灭活疫苗和乳酸菌载体疫苗等新型疫苗,但免疫效果有待检测。此外,PEDV对猪以外的物种也具有潜在威胁。例如,PEDV识别的氨肽酶N（APN）和N-乙酰神经胺等受体普遍存在人体细胞,存在病毒感染人类的风险。蓝舌病（Bluetongue,BT）是由蓝舌病毒（Bluetongue virus,BTV）感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜溃疡性炎症病变为主要特征,其主要传播媒介为库蠓。BTV在世界各地频繁发生,据估算,BTV造成的年经济损失超过30亿美元。目前发现的BTV包含27个血清型,型间无交叉保护作用,因而使用传统疫苗不能提供完全保护。虽然已有针对多种血清型BTV重组疫苗的研究,但保护效果并不理想。目前并没有十分有效的疫苗控制PEDV和BTV感染。因此,寻找抑制PEDV和BTV感染的活性化合物对于防制PEDV和BTV具有重要意义。本研究建立了 一种高通量抗病毒活性化合物筛选方法,并优化试验条件,筛选出4种对PEDV具有明显抑制效果的活性化合物;此外,还发现了 1种HDAC6抑制剂能够抑制BTV的感染,HDAC6或许是抑制BTV感染的靶点之一。这些结果为PEDV和BTV的防制提供了新思路,而且建立的筛选方法亦可应用于其它动物或人类抗病毒药物研究。主要研究内容包括:1.Cell-based ELISA抗PEDV药物筛选及验证使用Cell-based ELISA,我们建立了 一种抗病毒药物筛选方法;结合PEDV的复制特点、抗体特异性、ELISA的敏感性等多方面因素优化试验条件,筛选了 173种小分子化合物,最终获得4种对PEDV有明显抑制效果的化合物;ELISA结果显示,这4种化合物的PEDV抑制率均超过50%;通过Western Blot、RT-PCR、qRT-PCR、空斑形成试验等验证,结果显示4种化合物均可以降低病毒mRNA水平,抑制蛋白表达,降低病毒滴度。2.HDAC6抑制剂Tubacin抑制BTV感染的研究Tubacin是组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）的特异性抑制剂。我们发现,使用Tubacin处理细胞后感染BTV-13,细胞病变较对照组明显减轻。通过半定量PCR、Western Blot、TCID50等试验验证,病毒RNA和蛋白表达水平下降,上清中病毒粒子含量减少。这些结果说明Tubacin可在一定程度上抑制BTV感染,Tubacin是抗BTV的潜在候选药物,HDAC6可能是抗BTV感染的靶点之一。本研究建立了 Cell-based ELISA抗病毒药物筛选方法,改善了如CPE法、MTT法、空斑形成实验等传统抗病毒药物筛选方法的不足,为筛选靶向其它病毒的活性化合物提供了重要参考;筛选得到4种对G1、G2亚群PEDV均具有抑制作用的药物,为PEDV的防制提供新思路,也为其它冠状病毒的抗病毒药物研究奠定了方法基础。另外,首次发现HDAC6的特异性抑制剂Tubacin能够抑制BTV的感染,这为进一步研究BTV的感染周期、BTV与HDAC6之间的互作以及BTV防制策略提供了重要线索。