南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)是近年发现和鉴定的一个斐济病毒属(Fijivirus)暂定新种,该病毒可引起水稻南方黑条矮缩病,是一种严重危害水稻生产的病毒病。MicroRNA(miRNA)是一种大小约21-23个碱基的真核生物内源性非编码小分子RNA。目前已发现多种miRNA在植物生长发育,细胞分化和应激反应中起重要作用。有研究表明,病毒侵染会导致寄主植物miRNA表达异常,对寄主miRNA途径的干扰被认为是植物病毒致病的一个关键因素。从miRNA层面探析病毒与寄主植物的互作机制,对深入揭示病毒的致病机理具有重要意义。本文采用Microarray技术和实时荧光定量RT-PCR.技术对与SRBSDV侵染相关的水稻miRNA进行了研究,所得结果如下:　　 1.明确了水稻7种miRNA表达量受SRBSDV侵染显著调节。采用Microarray技术对已知的309种水稻miRNA(Sanger数据库http://www.mirbase.org12.0版本)在病健株中的表达谱进行了比较分析,结果显示,水稻受SRBSDV侵染后,叶组织中有33种miRNA.表达水平受到了影响,其中miR164d、miR164a、miR164c和miR164e被显著下调;miR530-5p、miR1846a-5p和miR1858a被显著上调。　　 2.建立了5种miRNA实时荧光定量RT-PCR检测技术。试图建立以染料法茎环反转录引物实时荧光RT-PCR为基础的上述7种miRNA定量检测技术,结果证实,这种方法只能对其中的5种,即miR164a、miR164e、miR164d、miR164e和miR530-5p实施定量检测;而不能对另外两种(miR1846a-5p、miR1858a)实施定量检测,其原因是,基于这两种miRNA序列设计的茎环反转录引物在PCR反应中产生了大量的引物二聚体,干扰了目标miRNA的定量分析。　　 3.初步明确了5种miRNA的病程变化动态。受SRBSDV侵染后,水稻叶组织中,miR164a先被下调,15天后被上调;miR164c和miR164d在感病后的15天内均表现为下调;miR164e在感病后的第3天被上调,第6天被下调,第9天和12天又被上调,第15天被再次下调。miR530-5p相对表达量除了第9天低于健康水稻表现为下调外,其余几天都高于健康水稻,表现为上调。　　 4.明确了5种miRNA在水稻不同组织(根、茎、叶)中的表达特征。三种组织器官中均检测到5种miRNA的表达。其中miR530-5p在根(0.1813)、茎(0.1570)中的表达量明显低于叶片(1.0000),164家族四个成员在根茎中的表达量均高于叶片;164家族中的4种miRNA在三种组织中的表达量基本呈现相同的趋势:都是根中表达量最高,茎杆中次之,叶片中最少;miR164e(2.9208)在根中的相对表达量最高,miR530-5p(0.1813)在根中的相对表达量最低;miR164a(2.6007)在茎杆中的相对表达量最高,miR530-5p(0.1570)在茎杆中的相对表达量最低。miRNA表达量具有组织特异性,暗示miRNA的分布可能决定组织和细胞的功能特异性,要深入揭示病毒与寄主在miRNA层面的作用机制,应以植物特定组织器官为研究对象。　　 5.分析了5种miRNA靶基因及其在病害发生过程中的作用。采用生物信息学和文献分析方法,对5种miRNA的靶基因功能进行了分析。164家族中的4种miRNA均靶向NAC家族的CUC1、CUC2等基因,NAC基因家族在植物根、茎、叶、花等组织的分化发育中起作用,受SRBSDV侵染后,164家族的miRNA表达异常,可能与病株高节位分枝及气生根等症状表现有关。miR530-5p靶标为脂肪消化酶,糖基转移酶等一些代谢酶类基因,这些基因参与了植物生长发育与胁迫应答反应,SRBSDV侵染后,miR530-5p的异常表达,可能诱发水稻发生一系列的防卫响应。相关的实验验证值得深入开展。　　 这些结果为进一步研究microRNA在SRBSDV侵染水稻致病过程中的作用奠定了基础。