深圳南山区腹泻患儿诺如病毒筛查及其基因分型研究

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[目的]  1.初步了解深圳南山区秋冬季临床婴幼儿急性腹泻中轮状病毒、诺如病毒、星状病毒,肠道腺病毒的病原分布情况,为临床防治提供依据。  2.了解深圳南山区秋冬季感染性病毒腹泻中诺如病毒的感染情况,并进行初步的流行病学分析,加强对诺如病毒引起感染的监测。  3.对引起临床婴幼儿急性腹泻的主要病原-诺如病毒进行基因分型分析,为诺如病毒疫苗的研究和开发提供基础资料。  [方法]  1.标本采集与处理  收集深圳市第六人民医院(南山医院)2009年9月至2010年3月、2010年9月至2011年3月秋冬季5岁以下急性非细菌性腹泻婴幼儿的粪便标本617份,标本用生理盐水混匀,制成10%的悬液,于-80℃保存。  2.引物设计  通过查阅参考文献及通过基因组同源性比对,分别以RV、AstV、NV、EAdV4种病毒核酸序列保守区为靶点,设计病毒特异性引物。  3.多重RT-PCR方法检测婴幼儿急性腹泻常见病毒:RV、AstV、NV。单重PCR法筛查临床腹泻标本EAdV  4.用BECKMAN COULTER公司生产的CEQ8800测序仪对NV PCR筛查阳性标本进行基因测序分型。  5.统计学分析  应用统计软件SPSS17.0对计数资料进行卡方检验(x2test)或者确切概率法,双侧α=0.05,以P≤0.05为差异有统计学意义。  [结果]  1.在617份标本中,共检出291例至少感染一种腹泻病毒,总检出率为47.16%(291/617),其中265例为一种病毒感染,26例为混合感染。四种腹泻病毒以RV感染为主,检出率为32.90%(203/617);其次是EAdV,检出率为9.24%(57/617); NV检出率为7.13%(44/617); AstV检出率为1.94%(12/617)。  2.在265例单一腹泻病毒感染标本中,RV阳性率为67.92%(180/265);NV阳性率为14.72%(39/265);AstV阳性率为3.77%(10/265); EAdV阳性率为13.58%(36/265)。291份阳性标本中混合感染共26例,占8.93%(26/291),以RV合并其他病毒感染为主,占92.31%(24/26),两种混合感染25例,主要以RV和EAdV混合感染为主,占73.08%(19/26);2例RV和NV混合感染,1例RV和AstV混合感染;1例EAdV和AstV混合感染。三种病毒混合感染1例为RV、NV和EAdV混合感染。  3.实验结果显示,NV感染性腹泻发病高峰季节在10~11月份,占65.91%(29/44)。NV感染年龄在2岁以下的,占86.36%(38/44),7-12个月的婴幼儿感染率,占20.45%(9/44),与1-6个月的婴幼儿比较,感染率有明显差异。NV混合感染率为11.36%(5/44),较RV、AstV比较,混合感染率无明显差异,与EAdV比较,混合感染率有明显差异。男性感染率为45.45%(20/44),女性感染率为54.55%(24/44),男孩、女孩感染率无明显差异。  4.NV基因分析显示,测序的40株均属于GⅡ-4型,不同毒株间核酸序列同源性为98%~100%。  [结论]  1.RV、EAdV和NV是引起深圳市南山区婴幼儿急性腹泻的主要病毒致病原,混合感染以RV联合其他病毒感染为主,临床上应根据所感染病原体制定有针对性的诊治措施。  2.NV是深圳市南山区7-12个月婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体,感染较易发生10、11月份。混合感染率比其他病毒低,应加强对诺如病毒引起感染的监测,为病人的诊断、治疗提供依据。  3.GⅡ.4型是深圳市南山区婴幼儿诺如病毒感染性腹泻的主要基因型,不同毒株间核酸序列同源性为98%~100%,可为诺如病毒疫苗的研究和开发提供基础资料。
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