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目的:本研究通过侧脑室注射姜黄素(Curcumin,Cur),观察其对地塞米松诱导的胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的调控作用,并进一步研究影响糖异生的相关因素和调控信号通路,以此阐明Cur中枢给药缓解外周糖代谢作用及可能机制,从而为其临床转化奠立基础。 方法:1、对胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的影响:雄性SPF级SD大鼠进行侧脑室埋置导管,术后恢复一周。将侧脑室埋管成功的大鼠,随机分为对照(Control)组和造模组。造模组按1 mg/kg体重皮下注射地塞米松,对照组皮下注射等量生理盐水,1次/d,连续注射5d后,通过葡萄糖耐量(IPGTT)实验检测各组大鼠的血糖,将造模成功的大鼠,随机分为模型(Dex)组和姜黄素(Dex+Cur)组。Dex+Cur组侧脑室注射10μl的20 mM Cur,Control组和Dex组均侧脑室注射给予等量的DMSO,1次/d,每天记录摄食量及体重,连续注射3d后,通过IPGTT和丙酮酸耐量(IPPTT)测定,观察Cur对胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的影响。 2、对外周胰岛素抵抗的影响与抗氧化应激的关系研究:Cur侧脑室注射连续注射3d后,Western blot法检测脑皮质、下丘脑和肝脏组织中蛋白激酶B(PKB)的磷酸化水平(PKBser473)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、核转录因子-κB的抑制因子IkBα、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)、动力相关蛋白1(Drp1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)的蛋白表达情况。MDA试剂盒检测脑皮层、下丘脑中MDA的含量。 3、对胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的调控机制研究:Cur侧脑室注射连续注射3d后,检测血浆中游离脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、皮质醇及儿茶酚胺含量;Western blot法检测磷酸烯醇式丙酮酸酸羧化酶(PEPCK)、类固醇调节相关蛋白1(SREBP1)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6pase)及碳水化合物调节相关蛋白(ChREBP)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及磷酸化AMPK蛋白表达水平。 结果:1、对胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的影响:皮下注射地塞米松7d后,成功造成SD大鼠IPGTT损害并伴有IPPTT的异常升高,而Cur中枢给药明显缓解大鼠的IPGTT和IPPTT异常升高。 2、对外周胰岛素抵抗的影响与抗氧化应激的关系研究:Cur中枢给药后,与Dex组相比,脑皮质胰岛素信号蛋白PKB磷酸化及炎症抑制性调控蛋白IkBα的表达量无显著性差异;在肝脏组织中,胰岛素信号蛋白PKB磷酸化水平明显高于Dex组,但对炎症IkBα和内质网应激信号蛋白GRP78均无明显影响。Cur中枢给药后,与Dex组相比,MDA的含量明显低于Dex组;但WB实验结果显示,Cur中枢给药对Nrf2特异调控的蛋白NQO-1、Keap1、线粒体促融合蛋白OPA1、Mfn2及促分裂蛋白Drp1均无明显作用。 3、对胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的调控机制研究:Cur中枢给药后,与Dex组相比,血清中的TG、NEFA及T-CHO含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。Cur中枢干预后PEPCK、G6pase及ChREBP的蛋白表达明显低于Dex组(P<0.05)。与Dex组相比,Cur中枢干预后血清中的皮质醇、儿茶酚胺含量明显减少(P<0.05)。 结论:1、 Cur中枢给药能够抑制地塞米松诱导胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生。 2、Cur中枢给药对地塞米松诱导胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖异生的调控作用与促进肝组织中PKB磷酸化和抗氧化应激有关。 3、Cur中枢给药调控地塞米松诱导胰岛素抵抗模型大鼠肝脏糖原异生与降低血清中的TG、NEFA及T-CHO含量,抑制PEPCK、G6pase、ChREBP的蛋白表达量和皮质醇、儿茶酚胺的合成有关。