【摘 要】
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目的:食管鳞状细胞癌（Esophageal Squamous-Cell Carcinoma,ESCC）,癌组织中N-α乙酰基转移酶（Naa10P）表达水平较癌旁组织中明显升高,食管癌严重威胁着健康,我国食管恶性肿瘤病理分型以鳞状细胞癌较为多见。患者预后极差,其5年生存率较低,且患者常常存在化疗耐药情况。目前尚无有效的靶向药物抑制食管癌细胞的生长,参与调控食管癌细胞增殖周期的具体机制尚不清楚。因Na
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目的:食管鳞状细胞癌（Esophageal Squamous-Cell Carcinoma,ESCC）,癌组织中N-α乙酰基转移酶（Naa10P）表达水平较癌旁组织中明显升高,食管癌严重威胁着健康,我国食管恶性肿瘤病理分型以鳞状细胞癌较为多见。患者预后极差,其5年生存率较低,且患者常常存在化疗耐药情况。目前尚无有效的靶向药物抑制食管癌细胞的生长,参与调控食管癌细胞增殖周期的具体机制尚不清楚。因Naa10P在食管癌组织中高表达,本研究通过体外培养食管鳞状细胞癌ECA109细胞系的基础上,探讨Naa10P表达对食管鳞状细胞癌的细胞周期及其对药物敏感性的影响,阐述Naa10P通过β-Catenin信号通路调控其细胞周期,确定Naa10P表达在食管鳞癌细胞对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响,在治疗食管鳞状细胞癌、增加化疗药物敏感性方面提供新的思路。方法:1.利用小干扰RNA（siRNA）构建Naa10p低表达的人食管鳞癌ECA109细胞系,实验分为ECA109-siRNA-Naa10组、ECA109-siRNA-NC组,ECA109-空白组。2.通过荧光显微镜、qrt-PCR及蛋白质印迹法鉴定siRNA对细胞的干扰效率。3.流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法绘制生长曲线,蛋白质印迹法鉴定β-Catenin信号通路中β-Catenin、乙酰化β-Catenin（Acetyl-β-Catenin）、Cyclin D1、C-Myc的蛋白表达水平。4.使用CCK-8法检测各组细胞经不同DDP浓度处理后对DDP的敏感性。结果:1.siRNA转染及转染效率设置不同Lip2000与siRNA浓度比例,荧光显微镜观察,每孔（六孔板）给予浓度比为10u L:10u L时为最佳转染比例。经qrt-PCR及蛋白质印迹法鉴定转染成功,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.蛋白质印迹法鉴定β-Catenin信号通路中关键蛋白表达水平ECA109-siRNA-Naa10组、ECA109-siRNA-NC组、ECA109-空白组的β-Catenin表达水平无差异（P>0.05）,ECA109-siRNA-Naa10组的乙酰化β-Catenin、Cyclin D1、C-Myc表达水平显著低于ECA109-siRNA-NC组、ECA109-空白组,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.流式细胞仪检测细胞周期流式细胞仪检测细胞周期中G0/G1期显示:ECA109-siRNA-Naa10实验组（64.833±5.685）、ECA109-siRNA-NC对照组（56.833±1.793）、ECA109-空白组（54.700±4.762）。ECA109-siRNA-Naa10实验组的G0/G1期细胞占比相比于其余两组明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.CCK-8法绘制细胞生长曲线ECA109-siRNA-Naa10组细胞周期生长曲线较ECA109-siRNA-NC组、ECA109-空白组缓慢（P<0.01）,即细胞增殖性降低。5.使用CCK-8法检测各组细胞经不同DDP浓度处理后对DDP的敏感性。ECA109-siRNA-Naa10组、ECA109-siRNA-NC组与ECA109-空白组对DDP的半数抑制浓度（IC50）分别为:（12.776±0.739）μg/m L、（19.223±0.276）μg/m L、（18.526±0.568）μg/m L,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:1.通过降低Naa10p表达,β-catenin信号通路中乙酰化β-catenin、靶基因Cyclin D1、C-Myc的表达水平显著降低,食管鳞癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞增殖性明显减慢。2.通过降低Naa10p表达,食管鳞癌细胞系的IC50值明显降低,可增加ECA109细胞对DDP的敏感性。
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