伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)能感染多种家畜和野生动物,以猪感染最为普遍,给养猪业造成巨大损失。 疫苗免疫接种是防止及消灭伪狂犬病的主要手段。转基因植物生产的疫苗以其生产成本低廉、安全性高、贮运简单和生物活性高等特点,逐渐成为当今疫苗研究领域的热点之一。众多的研究结果表明,利用植物细胞对疫苗的保护作用,直接饲喂含有疫苗的植物组织,可使动物粘膜乃至体液产生特异性的免疫应答。 本实验以可直接饲用的马铃薯作为伪狂犬病病毒的糖蛋白基因gD的表达植物。构建了以马铃薯茎段作为外植体的再生体系,添加2mg/L ZT和0.1mg/L NAA的MS培养基,可使马铃薯茎段愈伤组织诱导率达70％,出芽率达38％。 添加0.5mg/L的硝酸银可明显减少愈伤在继代过程中的褐化程度,并且促进愈伤组织分化,使出芽率达50％以上。构建并鉴定了伪狂犬病病毒gD基因的表达载体pBI-gD,此载体含有：卡那霉素抗性基因(npt Ⅱ)和组成型表达启动子(CaMV35S)目的基因(gD基因)。 将pBI-gD转化农杆菌LBA4404后,用其侵染马铃薯茎段,经50mg/L的卡那霉素筛选,并诱导愈伤再生后,获得21株抗卡那霉素再生植株。取其中4株作PRC鉴定后均呈阳性,初步确定gD基因已转化到马铃薯中。 通过一系列的实验,确定农杆菌液OD600值为0.1～0.2,侵染茎段1h,共培养3天的转化效果最好,该条件下30天后获得的抗性愈伤率达到52.3％。本研究为外源基因对马铃薯的转化以及为伪狂犬病转基因植物可饲性疫苗的研制奠定了基础。