甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用及免疫相关基因表达的调节

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本研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为试验对象,研究了甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用及免疫相关基因表达的影响。1.在研究甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用的影响实验中,将大小基本一致的健康草鱼随机分为2组,即实验组和对照组,实验组为基础饲料中添加0.2%的甘露寡糖(MOS)组,对照组组为基础饲料(CON)组。试验鱼分别投喂对应饲料48d,在实验结束时刮取草鱼前肠粘液进行处理,提取肠粘蛋白,将一定浓度的肠粘蛋白与细菌进行孵育固定、革兰染色,在油镜下对粘附细菌进行观察计数。研究甘露寡糖对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌对草鱼肠粘液粘附作用的影响。结果显示,在饲料中添加甘露寡糖后,草鱼前肠粘液蛋白对嗜水气单胞菌和枯草芽孢杆菌的粘附数量有显著影响(P<0.05),对大肠杆菌和植物乳杆菌的粘附数量没有显著影响(P>0.05)。甘露寡糖提高了枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌对草鱼前肠肠粘液的粘附能力。2.在饲料中添加0.2%甘露寡糖,饲养草鱼28d后草鱼经腹腔注射3.2×106cell/mL嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)0.1mL,在注射细菌后24h、48h、72h、96h和120h,分别取草鱼头肾、脾、肝和后肠。利用荧光定量PCR分析甘露寡糖对感染嗜水气单胞菌后草鱼头肾、脾和肝中IL-1β和IL-10及后肠中IL-1β、IL-10、IFN和TLR4表达的影响。结果显示,在草鱼头肾中,MOS/I(0.2%甘露寡糖+注射Ah)组IL-1β的表达在注射嗜水气单胞菌后48h显著高于CON/I(基础饲料+注射Ah)组;MOS/I组中1L-10的表达在注射嗜水气单胞菌72h显著高于CON/I组,在96h时显著低于CON/I组。在草鱼脾脏中,MOS/I组IL-1β的表达在注射细菌后72h和96h均显著低于CON/I组;IL-10的表达在注射细菌后48h和96h均显著低于CON/I组。在草鱼肝脏中,MOS/I组IL-1β和IL-10的表达在注射细菌后48h显著高于CON/I组,但在注射后72h和96h时该2种基因的表达降低并低于CON/I组。在草鱼的后肠中,注射细菌24h后CON/I组鱼体后肠中IL-1β的表达量显著高于MOS/I组,CON/I组草鱼注射嗜水气单胞菌后IL-1β的表达逐渐升高,MOS/I组IL-1β的表达相对平稳;MOS/I组IL-10在注射细菌后72h降低。MOS/I组中IFN的表达量均显著高于CON/Ⅰ组(除72h)。MOS/Ⅰ组中TLR4的表达在注射细菌后48h和72h显著高于CON/Ⅰ组。表明甘露寡糖在鱼体感染嗜水气单胞菌时能快速调节草鱼各组织中免疫相关基因的表达量,增强鱼体抵抗力。
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