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绿僵菌是一种重要的昆虫致病真菌，作为生物杀虫剂在防治农业害虫方面具有巨大潜力。其作为生物农药优势明显，如对生态环境安全无污染，无农药残留，寄主不易产生耐药性，能够有效的防治农业害虫的再次猖獗，对于刺吸式害虫等害虫的生物防治中尤其占据优势；但作为新型的农药，生物农药的缺陷也极为明显，如侵染宿主时的效果慢周期长、防治效果不稳定，这些缺陷，严重阻碍了绿僵菌在农业生产中的大规模应用，而本研究旨在通过基因工程技术，阐明钙调磷酸酶应答锌指转录因子Crz1基因对于昆虫致病真菌绿僵菌抗逆性和毒力的影响，提高对生物杀虫剂的认识，对于提高绿僵菌毒力及环境适应性奠定一定的理论基础，以改善生物杀虫剂的局限性。本研究以昆虫病原真菌绿僵菌为材料，利用基因敲除及回复技术方法研究MaCrz1基因的功能，主要的研究结果如下：1）MaCrz1生物信息学分析根据蝗绿僵菌基因组序列设计引物，测序获得了转录因子全长序列，命名为MaCrz1，预测其编码729个氨基酸，具有2个相似的C2H2锌指结构域。2）获得MaCrz1敲除及回复突变菌株构建了MaCrz1的敲除及回复载体，经PCR及Southern杂交验证获得正确的敲除及回复突变菌株。3）MaCrz1影响绿僵菌对于钙离子的敏感性观察敲除MaCrz1菌株在加入钙离子培养基中的生长情况，结果表明其生长较野生型和回复菌株明显受到抑制，暗示MaCrz1在调控胞内钙离子平衡中起重要作用。4）MaCrz1影响绿僵菌的抗逆性以及抗氧化性测试MaCrz1敲除菌株在加入细胞壁破坏剂及氧化剂等培养基中的生长情况，发现敲除菌株的生长受到明显抑制，说明MaCrz1在绿僵菌的抗逆及抗氧化方面具有重要功能。5）MaCrz1影响绿僵菌抗紫外能力经过紫外处理后,ΔMaCrz1萌发率下降50%所需照射时间(GT50)仅需2.9h，而野生型和回复菌株的GT50分别为6.5h和5.9h，说明ΔMaCrz1敲除菌株的抗紫外能力明显下降。6）MaCrz1影响绿僵菌的致病性敲除MaCrz1显著减弱了突变菌株的毒力，在体外点滴实验中，敲除菌株对东亚飞蝗的半致死时间显著高于野生型，而在体内注射实验中，野生型菌株，敲除菌株和回复菌株三者的半致死时间无明显差异。7）MaCrz1影响绿僵菌附着胞的形成利用蝗虫后翅诱导蝗绿僵菌形成附着胞，MaCrz1敲除后，绿僵菌形成附着胞的能力受到抑制。8）MaCrz1影响绿僵菌细胞壁的完整性对绿僵菌细胞壁多糖几丁质及β-1-3葡聚糖的染色分析，发现敲除菌株的两种多糖染色强度明显弱于野生型，说明MaCrz1参与调控绿僵菌细胞壁的成分。