禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒(Avian Influenza virus，AIV)引起的一种禽类的感染和／或疾病综合征。近年来，AI的流行愈演愈烈，特别是2003年至今，该病已经从亚洲蔓延到欧洲和非洲。自1997年香港AIV感染人事件以来，已有近百人被发现死于AIV感染，而且仍不断有新病例出现。科学家们预测AI的流行可能会再次引发人类流感的大暴发。目前对AI的研究热点集中在病毒基因的克隆、病毒的检测方法研究、疫苗的研制等方面，而针对AI的基础研究的报道不多，且研究方向大多为AIV对人的影响。迄今为止，关于AIV对天然宿主鸡致病机制的研究，仍停滞在组织和细胞水平。对AIV感染过程中宿主的应答机制，感染后引起动物快速死亡的分子机制，宿主细胞蛋白和病毒蛋白之间的相互作用及其意义，以及不同毒力AIV在宿主体内的分布规律等方面的研究并不多见。弄清AIV对鸡的致病机制，不仅有助于防制动物的AIV感染，而且对研究AIV对人的感染机制也有重要的参考意义。为进一步研究AIV的致病机制，作者对AIV抗原在鸡体内的分布规律，AIV感染过程中鸡的基因差异表达，以及宿主蛋白和病毒蛋白之间的相互作用等进行了研究。主要工作和研究结果如下：1 原位杂交检测禽流感病毒方法的建立 以A／V感染MDCK培养细胞，建立了感染模型。通过RT-PCR扩增大小为543bp的病毒核蛋白(NP)基因的保守片段，经地高辛标记，制备NP基因核酸探针，建立了AIV的细胞原位杂交检测方法。通过对原位杂交条件的优化，使该检测方法具有了良好的特异性、敏感性和可重复性。该方法的建立为AIV的精确定位和研究其致病机制提供了较好的选择。2 禽流感病毒感染鸡的病毒定位 以低致病性AIV感染鸡，建立病理模型，取各器官组织制备石蜡切片。利用原位杂交检测AIV，研究病毒在组织内的分布。结果显示，AIV在感染鸡以后，病毒抗原主要分布于肠上皮细胞、喉和气管软骨细胞的基质以及肺泡壁上皮细胞内，而且只能在感染初期检测到病毒核酸，其他的内脏器官内则始终检测不到病毒核酸。试验表明，低致病性AIV只能存在于实质器官以外的器官组织，并很快被宿主清除。AIV抗原在喉和气管软骨细胞的基质内的出现，是本试验的一个新发现，这可能是病毒躲避宿主免疫的一种手段。3 鸡对禽流感病毒感染应答基因的筛选与鉴定 通过高致病性AIV感染鸡，建立了试验动物模型。利用抑制性差减杂交技术，成功构建了AIV感染过程中鸡的肾脏组织双向差减cDNA文库。通过PCR和斑点杂交，从文库中筛选出271个差异克隆，经序列测定共获得205个差异表达EST。