荨麻属(Urtica)植物麻叶荨麻(Urtica cannabina L.)主要分布于我国西北、东北、华北及四川等地,全草或根入药,具有祛风除湿,活血,解痉,解蛇毒等功效。近年来国外对于同属的大荨麻(Urtica dioica L.)研究较多,其具有显著的生物活性,并已将其开发成多种治疗风湿及前列腺增生的药物。国内学者对裂叶荨麻(U. fissa Pritz.)、狭叶荨麻( U. angustifolia Fisch.ex Homem.)和麻叶荨麻的化学成分和生物活性也进行了一些研究。药理实验研究表明麻叶荨麻籽有较好的抑菌作用;麻叶荨麻根水煎液对狗有剂量依赖性降低血压作用,对兔及蟾蛤心脏亦有明显的强心作用;麻叶荨麻叶水煎液有显著的抗炎作用。本文对麻叶荨麻叶的化学成分和多糖的活性及含量测定进行了研究。目的:对麻叶荨麻叶极性的化学成分进行研究,采用系统溶剂萃取法和硅胶、聚酰胺及葡萄糖凝胶柱色谱等分离方法对其化学成分进行系统分离,得到单体化合物运用UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱鉴定技术分析确定结构式,为寻找其有效成分提供基础性研究。运用二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀实验研究麻叶荨麻多糖的抗炎活性。采用苯酚-硫酸比色法对麻叶荨麻叶的多糖成分进行含量测定。方法:1、麻叶荨麻叶化学成分的提取、分离及结构鉴定:取干燥麻叶荨麻叶5.4 kg用70%乙醇加热回流提取三次,合并滤液浓缩得到浸膏,依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取,分别得各部分萃取物。醋酸乙酯萃取物采用两种分离方法:醋酸乙酯萃取物11.1 g用聚酰胺柱色谱分离,30%、70%乙醇洗脱部分得到白色固体,分别经硅胶柱色谱分离纯化后得到化合物1(31 mg)和化合物2(22 mg)。醋酸乙酯萃取物9.4 g采用硅胶柱色谱分离,得到各流份进一步经硅胶色谱和HPLC分离,得到化合物3~7(分别为2 mg、28 mg、24 mg、40 mg、20 mg)。正丁醇萃取物也采用两种方法分离:正丁醇萃取物41.1 g用硅胶柱色谱以及ODS反相色谱分离得到化合物5(24 mg)和化合物8(5 mg);正丁醇萃取物15 g过D101型大孔树脂柱,用70%乙醇洗脱得到白色固体,进一步纯化得到化合物9(60 mg)。将所得化合物分别运用化学方法和UV、IR、NMR、MS等波谱分析技术进行结构鉴定。2、多糖抗炎活性研究:二甲苯致小鼠鼠耳肿胀实验:受试药物的制备,采用石油醚脱脂后水提Sevage法除蛋白从麻叶荨麻叶中提取制得精制多糖,精制多糖水溶后将其配制至0.2 mg/ml。采用二甲苯致小鼠鼠耳肿胀药理模型,阿司匹林为阳性对照物,观察不同组小鼠耳廓肿胀程度差异。3、麻叶荨麻叶多糖的含量测定:采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量:(1)多糖提取与精制:采用加热回流法提取多糖,经去脂、去蛋白等步骤纯化,得精制多糖。(2)苯酚试液的制备:将苯酚蒸馏后,加水溶解,备用。(3)供试品溶液的制备:供试品采用超声水液提取法,定容后备用。(4)标准曲线的制备:配置合适浓度的葡萄糖溶液,选择合适的波长,测定吸收度。(5)重现性实验:精密称取5份药材制备供试品溶液,测定吸收度,考察分析方法重现性。(6)加样回收率实验:称取已知含量的样品,准确加入一定量的对照品溶液,计算加样回收率。(7)精密度实验:精密称取5份药材制备供试品溶液,测定吸收度,考察分析方法精密度。(8)稳定性实验:测定多糖溶液、标准品溶液、样品溶液在一个小时之内的吸光度以测定稳定性。结果:1、麻叶荨麻叶化学成分研究:通过溶剂提取法和色谱法从麻叶荨麻叶70%乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇萃取部分分离得到了9个化合物,经化学和波谱分析,确定了8个化合物的结构,1个化合物的结构待定。它们分别鉴定为β?谷甾醇(1),胡萝卜苷(2),棕榈酸(4),尿嘧啶(5),(2S, 3S, 4R, 8E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十四烷酰胺]-8(E)-十八烯-1,3,4-三醇(6),1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S, 3S, 4R, 8E)-2-[ (2′R)-2′-羟基二十四烷酰胺]-8(E)-十八烯-1,3,4-三醇(苦瓜脑苷)(7),胸腺嘧啶(8),硝酸钾(9)。其中化合物5、6、7、8四个化合物为首次从荨麻属植物中分离得到。2、多糖抗炎活性研究:麻叶荨麻叶中的多糖对二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀实验结果表明,麻叶荨麻叶多糖能够有效抑制二甲苯所致的耳廓肿胀(P<0.01),其中低剂量(0.2 mg/ml)组和阿司匹林作用相当(P>0.05),高剂量组则优于阿司匹林(P<0.01)。表明麻叶荨麻叶多糖具有抗炎活性,并且随浓度的增大,活性增强。3、麻叶荨麻多糖的含量测定:测定波长490 nm,苯酚-硫酸显色,回归线性方程为C = 0.0633A+0.0002,线性关系良好(r = 0.9997),麻叶荨麻叶中多糖含量为5.96%,重现性RSD = 4.13%,加样回收率RSD = 2.17%,样品溶液稳定性RSD = 1.43%。结论:化学成分研究中提取溶剂、提取方法选择适当,采用硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶等柱色谱法对麻叶荨麻叶的极性化学成分实现了较好的分离及纯化,分离并确定了8个化合物的结构,4个化合物为首次从该属植物中分离得到,为麻叶荨麻叶的生物活性提供了物质基础的研究。麻叶荨麻叶多糖的抗炎活性初步研究表明,其多糖具有显著的抗炎活性。用苯酚-硫酸法对麻叶荨麻叶多糖进行含量测定,方法简单可靠,专属性强,重现性好,确定了麻叶荨麻叶中多糖的含量。