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目的:
明确肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的启动和调控效应及其具体的作用机制。
方法:
C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、0h-ALI组、6h-ALI组、24h-ALI组、FLT3-ligand(FLT3L)预处理组、来他替尼(lestaurtinib)预处理组和DMSO对照组，分别给予FLT3L、lestaurtinib预处理5天后复制ALI模型，6h或24h后处死小鼠留取肺组织，采用流式细胞术检测CD11c+CD11b+双阳性细胞占肺单个核细胞的比例评价肺cDCs的数量，检测肺cDCs表达MHCⅡ或CD80的比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测肺IL-6、TNF-α的浓度评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿重/体重比评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查和肺损伤评分评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群的漂移;ELISA检测肺IFN-γ及IL-4水平评价肺组织Th1/Th2型细胞因子的平衡。
结果:
6h-ALI组肺cDCs占肺单个核细胞的比例(％)显著高于0h-ALI组[(2.25±0.25)vs(0.93±0.40),P＜0.05]及24h-ALI组[(2.25±0.25)vs(1.01±0.28),P＜0.05]，其肺cDCs表达MHCⅡ的比例(％)亦较0h-ALI组[(55.51±11.72)vs(6.67±0.87),P＜0.05]和24h-ALI组[(55.51±11.72)vs(10.94±2.55),P＜0.05]升<中文标题>=高。而与6h-ALI组相比，FLT3L预处理显著增加ALI成模后6h肺cDCs占肺单个核细胞的比例(％)[(6.08±3.16)vs（2.25±0.25），P＜0.05]及其表达MHCⅡ的比例(％)[(73.15±9.07)vs(55.51±11.72)，P＜0.05]，还可上调成模后6h肺组织IL-6水平(P＜0.05)和TNF-α水平(P＜0.05)，并提高肺湿重体重比(P＜0.05)和肺病理损伤评分(P＜0.05)，此外FLT3L预处理组肺组织MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和IFN-γ水平均较6h-ALI组显著升高(均P＜0.05)。而与DMSO对照组相比，lestaurtinib预处理显著降低ALI成模后6h肺cDCs占肺单个核细胞的比例(％)[(1.41±0.13)vs(2.36±0.27)，P＜0.05]及其表达MHCⅡ的比例(％)[(41.56±8.18)vs(50.85±6.91)，P＜0.05]，还可下调成模后6h肺组织IL-6水平(P＜0.05)和TNF-α水平(P＜0.05)，减轻肺湿重体重比(P＜0.05)和肺病理损伤评分(P＜0.05)，此外lestaurtinib预处理组肺组织MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均较DMSO对照组显著下降(均P＜0.05)。
结论:
ALI早期即存在肺cDCs的快速聚集和分化成熟，功能活化的肺cDCs进而可通过加剧肺内中性粒细胞的浸润与增强Th1免疫应答及促炎性细胞因子的释放启动和放大ALI早期炎症反应级联，最终导致和加重肺损伤。