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目的:利用唾液特异性表达的mRNA分子的编码SNP位点,建立一个能够鉴定由不同体液/组织构成的混合斑的复合体系,并利用SNP位点的信息将混合斑中唾液的提供者单独、完备的抽离出来。方法:该检测方法的建立利用不同体液中特异性表达的mRNA分子,结合复合PCR技术和SNaPshop微测序技术,对法医混合斑中4个唾液特异性mRNA分子中的12个编码SNP位点进行分型,同时利用系统中包含的其他组织/体液种类指示标记对其中可能含有的组织/体液种类进行检测。不同组织/体液特异性表达mRNA分子的选择、唾液特异性mRNA分子中编码SNP位点的选择及PCR引物的设计遵循以下原则:(1)唾液特异性mRNA分子及5种其他体组织/液特异性mRNA分子均来自于国内外已发表文献报道,并且被广泛接受;(2)不同组织/体液的mRNA分子标志物在其特定组织/体液中表达量丰富且特异性良好,在其他组织/体液中没有表达或表达量很小;(3)唾液特异性mRNA分子中编码SNP位点的最小等位基因频率(MAF)大于0.1;(4)编码SNP位点的位置应位于外显子-内含子连接处上下游300个碱基范围内,以便于跨越不同的外显子设计引物,保证扩增产物不受基因组DNA的影响;(5)所有的PCR扩增产物长度小于300个碱基,使该检测体系更适用于法医降解检材的分析。对待检测样本进行RNA提取、反转录后,进行复合PCR扩增,得到复合扩增产物,之后利用SNaPshot微测序试剂盒进行单碱基延伸、毛细管电泳检测(CE),得到混合斑中唾液成分的12个编码SNP位点分型结果和除唾液外其他5种可能存在的组织/体液的指示标记,从而对混合斑中唾液成分进行分型,和对混合斑的组成成分进行推测。结果:1、成功建立了包含12个唾液特异性编码SNP位点和5种常见组织/体液(外周血、月经血、精液、皮肤、阴道分泌物)指示标记的SNaPshot微测序检测体系,并对检测体系进行了特异性、灵敏度和降解检材分析能力的评估,显示该体系性能良好。2、成功对模拟混合斑样本进行检测,得到了其中唾液成分的分型结果,正确推测了混合斑的组成成分。包括唾液分别与外周血和月经血按1:50的比例制成的混合斑;唾液分别与精液、皮肤、阴道分泌物按1:100的比例制成的混合斑;来自不同体液提供者的唾液与外周血、月经血、精液、皮肤、阴道分泌物按1:50的比例制成的混合斑。3、对唾液特异性mRNA中12个编码SNP位点进行检测,分型结果与数据库一致,并通过Sanger测序验证,与本检测体系得到的结果一致。4、对山西人群中100个无关个体的唾液样本进行分型,评估了该体系的综合识别能力。结论:利用唾液特异性mRNA中的编码SNP多态性标记和其他5种常见体液指示标记结合SNaPshot微测序技术建立的唾液特异性编码SNP分型检测体系,为混合斑中唾液成分溯源提供了一种新的方法;在法医实际应用中,特别是对性侵案件中得到的可能含有唾液成分的混合斑分析有着重要意义,能为案件侦破提供更加全面科学的证据。