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脂肪酸合酶(fattyacidsynthase,EC2.1.3.85,FAS)是脂肪酸生物合成过程中将小分子碳单位聚合成长链脂肪酸的关键酶。据报道FAS是治疗肥胖症和癌症的双重靶点。肿瘤细胞脂肪酸的合成依赖于细胞内的FAS,以满足肿瘤细胞分裂、增殖的需要。肿瘤细胞内的FAS水平远远高于正常组织细胞,其表达水平与恶性肿瘤的预后有相关性。 姜黄素(Curcumin)是从植物姜黄中提取的一种酚性色素。姜黄素药理作用广泛,是有效的抗致突变剂和抗促癌剂。在中国,姜黄一直作为药食两用的药材,具有破血行气,通经止痛等作用。国内外许多文献相继报道了姜黄中姜黄素类物质的生理功能和作用机理。国内外一些研究表明,姜黄素可以抑制肿瘤细胞增殖和促进细胞凋亡,可以作为一种药物或作为传统化疗药物的辅助用药,用于肿瘤治疗,但姜黄素的抑癌机制尚未明确。 近期研究发现姜黄素是天然来源的FAS抑制剂,其在体外对FAS抑制的半抑制浓度(IC50)为10.5μg/ml(28.6μM),它对FAS的抑制效应强于已经报到的FAS抑制剂EGCG,本实验研究姜黄素对乳腺癌细胞MDA-MB231及肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响与FAS的关系。通过采用MTT法测定姜黄素在不同浓度对HepG2的抑制作用,Hoechst33258染色法及AnnexinV/PI双染色法分析细胞凋亡,westernblotting方法分析加入不同浓度的姜黄素后细胞内FAS的表达量的变化,RT-PCR方法测定FAS的mRNA水平的变化,测定细胞内FAS活性的变化,加入外源的棕榈酸钠对细胞凋亡进行补救。结果表明,姜黄素对MDA-MB231细胞活力经过24h培养后的IC50值为3.63μg/ml;HepG2细胞活力经过24h培养后的IC50值为8.84μg/ml,加入姜黄素后MDA-MB231细胞及HepG2细胞内FAS的活性明显下降,FAS的表达量及FAS的mRNA水平都有显著的下降。另外加入姜黄素后MDA-MB231细胞内信号分子P-Akt、Bax、Bc1-2都有一定的变化。而HepG2细胞加入姜黄素的同时加入棕榈酸钠以后细胞活力得以恢复,在一定程度上补救了细胞凋亡。我们得出的结论是姜黄素可以介导MDA-MB231细胞及HepG2细胞凋亡,其抑癌机制是由于抑制了FAS从而导致脂肪酸合成受阻,无法正常的为肿瘤细胞提供正常代谢所需要的能量及原料,从而使得肿瘤细胞发生凋亡。 熊果酸(ursolieacid)是一种五环三萜类化合物,在自然界中分布广泛,如在陆英、枇杷叶、熊果、女贞子、山楂、车前子、夏枯草和白花蛇舌草等植物中以游离形式存在或与糖结合成苷存在。 近年来人们对其提取、抗肝炎作用、结构修饰物的作用及抗肿瘤作用等方面进行了深入研究,尤其是抗肿瘤机制研究方面颇有进展,为临床应用奠定了理论基础。 而熊果酸是另一种新发现的FAS抑制剂,其在体外对FAS抑制的IC50=6.0μg/ml(13.1μM),通过本次研究表明熊果酸引起肝癌细胞HepG2活力下降的半抑制浓度IC50为68.23μM,通过Hoechst33258染色法检测得出熊果酸诱导HepG2细胞的凋亡,其作用强度呈药物浓度依赖性。在HepG2细胞培养过程中,加入熊果酸后细胞内FAS的表达量及活性降低。在培养基中添加棕榈酸钠可以在一定程度上补救熊果酸引起的HepG2细胞凋亡。我们推论熊果酸下调FAS的表达影响了脂肪酸合成,肿瘤细胞缺乏正常代谢所需要的能量及原料,导致肿瘤细胞凋亡。