新疆阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的分子生物学研究 癌症是严重危害人类健康的疾病，已成为仅次于心血管病的人类第二杀手。癌的发生是由多因素引起的多阶段过程，包括启动、促进、进展三个阶段。细胞恶性增殖造成机体重要生命活动器官的毁损和肿瘤的广泛扩散转移是导致病人死亡的主要原因。从天然动、植物中寻找毒性低、疗效高的抗癌活性成分仍是近年来国内外癌症防治研究的热点之一。自八十年代，美国NIC、欧洲、日本及我国相继开展了从天然可食植物中筛检抗癌物的研究。很多植物被经典短测体系筛检，部分具有高效抗诱变作用的物质进行了体内外抗癌实验研究，有些抗癌活性成分被提纯、合成并用于临床，开辟了从天然植物中提取各种有效成分，以达到高效低毒抗癌目的研究的新领域。 在新疆独特的地理地貌和干旱荒漠生态环境下，有丰富的动植物和微生物资源，生长着上千种独特的可食用植物，阿魏蘑菇(Pleurotus Sapidus)是新疆特有的食用菇。研究表明，食用菇含有丰富的营养物质，某些食用菇中含有的多糖类物质，与人体的免疫功能、抗肿瘤活性明显相关。阿魏蘑菇味美鲜嫩、营养丰富，除了具有一般食用菇的特点外，还可药用，有良好的开发应用前景。 阿魏蘑菇是干旱草原大型真菌代表种，野生阿魏蘑菇受自然条件制约，其产量不大。目前，对野生阿魏蘑菇进行人工驯化栽培的研究已取得重大突破，并在疆内形成了一定的生产规模，产量可观、品质优良，具有很好的深加工开发价值。我们的初步研究表明，阿魏蘑菇不仅含有丰富的蛋白质、碳水化合物，多种维生素和矿物质；其多糖含量高，对S180荷瘤鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用。据此，在前期研究工作的基础上，我们进一步深入研究了阿魏蘑菇提取物体外抗肿瘤作用的强度及广度；分析了其中可能的抗肿瘤有效成分，并从分子生物学角度对其抗肿瘤机制进行了探讨，为阿魏蘑菇的更深层次研究与开发奠定了基础。 博士学位论文：新疆阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的分子生物学研究 一、新疆阿魏蘑菇粗提物及分离组分抗肿瘤实验研究 为研究新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用，本研究采用不同肿瘤细胞株体外培养技术，观察了阿魏蘑菇不同齐量的水提物和醇提物门丁’g／＊l、10’g／ml、10’g／ml、10‘g／ml。10－”g砌、10－’m枷1）对体外培养的人肝癌细胞株门J、人胃癌细胞株（MGC－803）、人宫颈癌细胞株（Hela）、小鼠肺腺瘤细胞株（SPC－A－l）细胞存活及蛋白合成的影响作用。以大鼠正常肝细胞（BRL）为正常对照细胞株，同时设立阴性对照及溶剂对照。受试物与细胞共培养 24 h，观察细胞存活量及活细胞蛋白含量的变化。结果显示，阿魏蘑菇水提物、醇提物 10－’g加 剂量组对各类型肿瘤细胞的生长及蛋白合成均有明显抑制作用仪＜0刀5，P＜0．01h 醇提物不同剂量组对肿瘤细胞生长及蛋白合成可产生不同程度的影响，对正常肝细胞的存活量无影响，相反可促进正常肝细胞的蛋白合成。阿魏蘑菇提取物的抗肿瘤作用可能与其干扰肿瘤细胞生长及蛋白合成有关。 在上述研究的基础上，对从阿魏蘑菇醇提物中分离获得的组分亦进行了体外抗肿瘤实验。结果显示，分离组分的体外抗肿瘤的强度及广度均明显低于醇提物及水提物。因此，后续研究将以醇提物及水提物为实验对象。 二、新疆阿魏蘑菇醇提物中有效成分的分离、分析 体外抗肿瘤实验的结果显示，阿魏蘑菇醇提物的抗肿瘤作用较强，在此基础上对其进行了抗肿瘤有效成分的分离分析。通过系统定性测试的结果，发现：阿魏蘑菇中可能含有糖类、皂贰、蛋白质、多‘肽、氨基酸、有机酸、生物碱、挥发油、三砧或凿醇、带双键的惦类等有效成分；而可能不含缀质、黄酮、惫醒、强心贰、香豆素等成分。 采用天然植物化学分离分析及鉴定技术，我们对阿魏蘑菇醇提物进行了有效成分的分离、鉴定，得到了4个单体／组分，并对其进行了熔点、紫外、红外等的检测，其中一组分进行了氨基酸种类及含量的测定。其中3个单体中均含有同一种成分一山梨醇；氨基酸测定结果 2 博士学位论文：新疆阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的分子生物学研究 显示，谷氨酸含量最高为0．56％，其次为丙氨酸含量为0．33％，精氨酸 0．10％，天冬氨酸为0二5％，缀氨酸为0．10％。阿魏蘑菇中是否含有其 它尚未被发现的功效成分，其确切的功效成分与抗肿瘤作用之间的关 系等问题均有待深入探讨。 三、新疆阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的分子生物学机制研究 我们选择阿魏蘑菇醇提物及水提物的抗肿瘤作用的分子机制进 行了研究。 1．采用检测细胞杀伤功能的MTT实验及检测细胞凋亡的HT实 验，研究发现：阿魏蘑菇醇提物及水提物对所选择的各类型肿瘤细胞 均具有强大的杀伤作用，尤以 0．ig／ml剂量组为明?