论文部分内容阅读
卵母细胞或胚胎的体外培养时,比体内的抗氧化剂水平低,因此卵母细胞或胚胎离开供体后不能得到母体抗氧化剂的保护。这也是制约体外培养效果的一个因素。本研究通过体外培养时添加抗氧化剂以提高体外培养的效果。EGCG是茶叶中的一种主要抗氧化物质,它是天然的抗氧化剂,且无毒副作用。本实验以山羊为动物模型采用TCM-199基础培养体系,通过添加不同浓度的EGCG来研究其对山羊卵母细胞体外成熟,受精的影响。主要的研究结果如下:首先,在TCM-199基础培养液中添加0、10、15、20和25μM不同浓度的EGCG,并分析结果。发现当添加EGCG浓度为15μM时对山羊卵母细胞的成熟有明显的促进作用,且差异显著(p<0.05)。其次,在山羊卵母细胞成熟阶段中添加EGCG浓度为15μM对后期成熟细胞受精也有明显的促进作用,且差异显著。BMP15是卵母细胞分泌因子重要成员之一,其在卵泡发育和卵母细胞成熟过程中发挥重要作用。目前,有关BMP15的研究主要集中于人、绵羊、奶山羊、牛、猪等,而在山羊中对于BMP15的研究主要限于多胎性方面的研究,尚未见有关山羊BMP15基因在山羊卵母细胞不同成熟阶段表达的相关研究报道。因此,本文欲通过对山羊BMP15基因在卵母细胞成熟过程中的表达研究,探讨BMP15在山羊生殖系统中所发挥的作用。根据从NCBI上查阅山羊的BMP15基因序列来设计引物,以其PCR产物作为内标,分别以山羊各个阶段卵母细胞反转录产物为模板,通过半定量RT-PCR检测了BMP15 mRNA在山羊卵母细胞成熟发育的不同阶段的表达情况,通过荧光PCR检测后发现BMP15在山羊卵母细胞成熟发育的不同阶段中有不同的表量。发现该基因在未成熟卵母细胞中表达水平较低,在培养12h其表达丰度达到峰值,并与卵丘扩展时间相一致,随后下降,推测BMP15可能在山羊卵丘细胞扩展中发挥重要作用。从而验证了BMP15山羊在卵母细胞成熟发育过程中发挥着重要的作用。采用免疫组化技术测定BMP15蛋白在性腺中的定位,结果显示:BMP15在山羊卵巢初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞中均有高度表达,表明BMP15蛋白在卵泡发育的整个过程中都起一定的作用,并且可能并不影响早期生殖细胞的发育。同时,在卵泡腔中也检测到该蛋白的表达,卵母细胞可能将该蛋白分泌至卵泡腔中,进而调节卵泡的发育。