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目的
研究苦参碱对豚鼠心肌钾通道和钙通道的作用,揭示其抗心律失常作用机制。
方法
(1)酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞动作电位时程(APD)、缓慢延迟整流钾电流(I<,Ks>)、快速延迟整流钾电流(I<,Kr>)、内向整流钾电流(I<,K1>)的作用。(2)利用离体豚鼠右心室乳头肌,以收缩张力(contraction force)、收缩/舒张速率(±dp/dt<,max>)、达峰时间为指标(leak time),研究苦参碱对豚鼠乳头肌收缩力的影响;结合全细胞膜片钳技术和激光扫描共聚焦显微镜观察苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞膜L-型钙电流(I<,Ca-L>)和细胞内钙([Ca<'2+>]i)的作用。
结果
(1)苦参碱呈剂量依赖性的延长APD<,50>和APD<,90>,1,10,100μM苦参碱延长APD<,50>从给药前86.2±6.84 ms至106.5±8.20 ms(n=5,p<0.05),128.3±8.71 ms(n=5,p<0.05),183.3±10.5 ms(n=5,p<0.01):APD<,90>从给药前143.8±15.0 ms延长至168.4±15.4 ms(n=5,p<0.05),191.2±11.8 ms(n=5,p<0.05),243.0±24.0 ms(n=5,p<0.01);苦参碱呈剂量依赖性抑制I<,Kl>的内向电流,在刺激电压为-120 mV时,10,100μM苦参碱使I<,Kl>从给药前-57.1±6.7 pA/pF减少到-44.0±4.2 pA/pF(n=12,P<0.05),-29.9±3.5 pA/pF(n=12,P<0.01),高浓度苦参碱使I<,Kl>的外向电流枞给药前0.72±0.46 pA/pF增加到1.46±0.39 pA/pF(n=12,P<0.01):苦参碱呈剂量依赖性抑制I<,Kr>,1,10,100μM 分别使I<,Kr>从给药前2.03±0.2 pA/pF减少到1.81±0.15 pA/pF(n=12,P>0.05), 1.57±0.16pA/pF(n=12,P<0.05),1.15±0.17 pA/pF(n=12,P<0.05)。 (2)苦参碱呈剂量依赖性增加豚鼠离体乳头肌的收缩力,上述作用可被1μM维拉帕米抑制。苦参碱200 μM可增加收缩力46.92±3.12%(n=5,P<0.05),乳头肌收缩速率增加为原来的175±21%(n=5,P<0.05),舒张速率增加为原来的139±28%(n=5,P>0.05);膜片钳结果显示苦参碱呈剂量依赖性增加I<,Ca-L>,使I<,Ca-L>失活曲线半数失活电压(V<,1/2>)向右偏移,在-10mV电压条件下,苦参碱1,10,100<,μM>使I<,Ca>由-14.4±0.63 pA/pF增加到-15.8±1.42 pA/pF(n=8,p<0.05),-17.6±1.19 pA/pF(n=8,p<0.05),-19.9±1.01 pA/pF(n=8,p<0.05):苦参碱100μM使I<,Ca>失活曲线V<,1/2>由正常的-22.6 ±0.62 mV向右偏移-9.8 ±0.4mV(n=8,p<0.05),K由正常12.0±0.60变为8.9±0.56(n=8,p<0.05);共聚焦结果显示苦参碱可增强由KCl所介导的[Ca<'2+>]i增加,苦参碱1,10,100μM分别使FI/FI<,0>增加5.06±0.93倍(n=6,与KCl相比,p<0,05),5.86±1.27倍(n=6,与KCl相比,p<0.05),6.63±1.52倍(n=6,与KCl相比,p<0.05);
结论
苦参碱的抗心律失常作用与其增加I<,Ca-L>和抑制I<,Kr>而延长APD,影响I<,Kl>稳定细胞膜电位有关;苦参碱可激活I<,Ca-L>使[Ca<'2+>]i增高,增强心肌收缩力。苦参碱是一具有正性肌力作用的抗心律失常药物。