论文部分内容阅读
目的探讨microRNA-34a(miR-34a)通过靶向抑制Notch1基因的表达对膀胱尿路上皮癌细胞株J82生物学行为的影响。方法查询基因组数据库，应用多种基因预测软件进行生物信息学分析，预测miR-34a可能靶向调控Notch1基因的表达；将miR-34a表达质粒或阴性对照质粒转染膀胱尿路上皮癌J82细胞，实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白印迹法（Western blot）分别检测两组经不同质粒转染的J82细胞中miR-34a、Notch1基因及Notch1蛋白的表达水平；萤光素酶实验检测miR-34a与Notch1基因的结合位点；新型四唑氮盐化合物比色法检测外源性miR-34a表达后的细胞增殖情况，流式细胞术、Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞凋亡、周期及细胞迁移、侵袭能力的变化，由此评估miR-34a的表达对J82细胞生物学行为的影响。结果miR-34a表达质粒组的miR-34a表达量为（2.408±0.789）×10-4,对照组为（0.153±0.029）×10-4，（P=0.0026)；miR-34a表达质粒组Notch1基因表达量为（3.001±0.106），对照组为（4.998±1.053），（P=0.0308）；miR-34a表达质粒组Notch1蛋白表达量为（0.747±0.050），对照组为(0.988±0.102),(P=0.0215)；miR-34a表达质粒组细胞萤光素酶活性为(0.422±0.028)，对照组为(2.392±0.148),(P<0.0001)；miR-34a表达质粒组细胞增殖受到抑制(P<0.0001)；细胞凋亡率（5.497±0.293）%，对照组凋亡率(1.237±0.116)%，（P<0.0001)；细胞周期阻滞于G0-G1期数量（62.200±0.754）%，对照组(54.510±1.501)%,(P=0.0015)；细胞迁移数量(179.300±21.020)，对照组(269.700±23.710)，(P=0.0078)；细胞侵袭数量（34.330±9.713），对照组(65.010±11.790),(P=0.0254)。结论miR-34a可与Notch1基因的3’非翻译区（3’UTR）结合靶向抑制Notch1基因表达，在膀胱尿路上皮癌J82细胞中外源性表达miR-34a可以抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，诱导细胞发生G0-G1周期阻滞，降低细胞迁移和侵袭能力，并通过影响上述细胞生物学行为降低肿瘤细胞恶性度，因此，miR-34a在膀胱尿路上皮癌J82细胞中可通过调控Notch1基因的表达发挥潜在的抑癌基因作用。