背景心脏瓣膜钙化性病变是常见的心脏瓣膜病理性改变之一。心脏瓣膜发生严重钙化后对心脏血流动力学、心脏瓣膜功能、患者的生活质量和预后均产生产生巨大影响。目前，多数研究提示在瓣膜间质细胞发生钙化的演变过程中，瓣膜间质细胞出现了不同程度的细胞凋亡，鉴于细胞凋亡是多基因调控的主动过程，其中caspase-3是凋亡的主要调控基因，因此细胞凋亡可能影响并参与了瓣膜间质细胞钙化过程。根据基因预测网站发现凋亡敏感标志物caspase-3与mir-30b在3’UTR端存在结合位点，同时国内学者已经通过基因芯片检测正常心脏组织与其他人体内脏器证实，mir-30b表达含量在心脏组织中最高，提示caspase-3可能受到mir-30b的调控继而影响心脏的生理、病理变化。目的1.通过体内、体外实验明确瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性并确定caspase-3在瓣膜间质细胞凋亡调控中的作用；2.分析mir-30b与细胞凋亡的相关性，并通过体外过表达和抑制实验明确mir-30b对细胞生存功能的影响。方法1.瓣膜间质细胞凋亡在钙化性心脏瓣膜病瓣膜中的表达通过常规组织学染色、免疫组织化学染色、TUNEL、Von Kossa染色、流式细胞术对瓣膜组织上的细胞凋亡情况进行分析。通过体外分离鉴定瓣膜间质细胞，应用流式细胞术、Von Kossa染色、Western blot对细胞学上凋亡情况进行验证。2.瓣膜间质细胞凋亡调控机制的初步探讨通过PCR检测瓣膜组织中mir-30b的表达含量，与瓣膜组织中凋亡情况作出相关性分析。心脏瓣膜间质细胞转染mir-30b mimics或inhibitors后，在体外，使用Annexin V-FITC/PI对瓣膜间质细胞双染后通过流式细胞检测术检测细胞凋亡情况，通过caspase-3活性检测进一步确定mir-30b对瓣膜间质细胞凋亡能力的影响，通过CCK-8检测mir-30b对瓣膜间质细胞株增殖能力的影响。Western blot检测调控mir-30b后细胞水平上凋亡相关基因caspase-3的表达。结果1.瓣膜间质细胞凋亡在钙化性心脏瓣膜病瓣膜中的表达常规组织学病理分析显示钙化是钙化性心脏瓣膜病瓣膜的主要病变，并伴随红色胶原纤维含量增高而蓝色的弹力纤维断裂、含量降低。通过TUNELl技术检测，钙化性瓣膜中细胞凋亡率显著高于无钙化瓣膜，差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫组织化学检测钙化性瓣膜中凋亡关键基因caspase-3阳性率显著高于无钙化瓣膜，差异具有统计学意义(P<0.01)。体外实验证实caspase-3是多基因调控的主动过程，是凋亡的主要调控基因。2.瓣膜间质细胞凋亡调控机制的初步探讨通过real-time PCR检测，mir-30b在钙化性瓣膜中的表达下降，在无钙化瓣膜组织中的表达升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。Mir-30b相对表达量与瓣膜组织细胞凋亡率呈负相关，下调mir-30b的表达可显著增加瓣膜间质细胞的凋亡，下调mir-30b的表达可显著抑制瓣膜间质细胞的增殖能力，差异具有统计学意义(P<0.01)。mir-30b的目标靶基因为凋亡关键基因caspase-3，下调mir-30b的表达可导致caspase-3表达显著增高（P<0.01）。结论1.在组织学与细胞学上，钙化性心脏瓣膜病瓣膜的钙化程度与瓣膜间质细胞凋亡率增加具有相关性2.钙化性心脏瓣膜病瓣膜钙化程度与caspase-3表达调控具有相关性，Caspase-3的上调表达导致瓣膜间质细胞凋亡增加。3. Mir-30b作为一种保护性因素通过下调Caspase-3的表达从而抑制瓣膜间质细胞凋亡。